試薬ホーム > 製品情報 > 遺伝子 > MethylEasy

メチルイージー!DNA中の5’メチル化シトシン検出を短時間で高感度に
25反応用 52,000円、96穴プレート用155,000円でご提供
MethylEasyTM DNA Bisulphite Modification Kit


25反応用キット写真

価格

Code No. 品名 メーカーコード 容量 希望納入価格
554-88931 MethylEasyTM DNA Bisulphite Modification Kit ME001 1キット
(25回用)
43,000円
551-88941 MethylEasyTM HighThroughput DNA Bisulphite modification kit -Centrifugation method MEHT002 1キット
(96プレート用)
135,900円
558-88951 MethylEasyTM HighThroughput DNA Bisulphite modification kit -Vacccum Manifold Method MEHT003 1キット
(96プレート用)
135,900円

*表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
*表示している希望納入価格は2012年12月の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

製品概要

本キットは、従来のbisulphite(重亜硫酸塩)法を改良し、修飾DNAの収率や操作性を向上させた製品です。
DNA分子中の5'メチル化シトシン(5'mC)と非メチル化シトシンを区別するために、重亜硫酸塩の処理により非メチル化シトシンをウラシルへ特異的変換する手法を利用しています。一方、5'mCはこの処理で何も変化しないため、処理後の修飾DNAをテンプレートとし、特異的なプライマーを用いたPCRによってDNA中のメチル化状態を検出することができます。
本キットで修飾したDNAは、Methylation Specific PCR、OBRA、MS-SNuPE、MALDI-TOF、マイクロアレイ分析に応用することが期待できます。
マイクロ遠心チューブ法(25回反応)と、96プレートを用いた多検体処理用(遠心法、吸引法)の計3種類のキットをご用意しております。

特長

  • 遠心分離操作が少なく、初心者でも簡単
    MethyEasyTM Kit: 25反応用  2回
    96プレート法 4回
    従来法や他社法:7〜8回
  • 高分子DNAを含め回収率が高い(図1)
  • 100pgのDNAからスタートできる(図2)
  • カラム精製やシリカ担体などへの吸着などのわずらわしい操作が不要(図3)
  • 処理時間:4〜16時間で終了。最速で4時間
  • DNAの前処理が不要
  • DNA増幅効率が高い
  • 処理後のDNAの安定性がよい(1ヶ月以)

DNA重亜硫酸塩修飾の原理

キット内容

キット内容 25反応用 96穴プレート用(遠心法) 96穴プレート用 (吸引法)
1. Reagent 1(アルカリ溶液) 5.2ml×1本 20.8ml×1本 20.8ml×1本
2. Reagent 2(Bisulphite粉末) 2g×1本 8g×1本 8g×1本
3. Reagent 3(6 mole/L グアニジンチオシアネート) 3ml×1本 25ml×1本 25ml×1本
4. Reagent 4 25ml×1本 7ml×1本 7ml×1本
5. Control Sample 1※1(未処理DNA) 40ul×1本 40ul×1本 40ul×1本
6. Control Sample 2※2(処理済DNA) 20ul×1本 20ul×1本 20ul×1本
7. Control Samples※3 3A & 3B(プライマー) 40ul×1本 40ul×2本 40ul×2本
8. Microcentrifuge tubes 2ml tubes 40ul×25本 - -
9. Conversion plate - 96well×1プレート 96well×1プレート
10. Purification plate - 96well×2プレート 96well×1プレート
11. Washing plate - 96well×2プレート 96well×1プレート
12. Elution plate - 96well×2プレート 96well×1プレート
13. Clear plate sealing film for Purification plate - film×2枚 film×1枚
14. Sealing caps for Conversion plate - 8キャップ×12枚 8キャップ×12枚
15. Sealing caps for Elution plate - 12キャップ×8枚 -

※1:修飾反応8反応分です。
※2:PCR20反応分です。
※3:1本でPCR20反応分です。ヒトおよびマウス由来のゲノムDNAを増幅できます。
   3Aは、1st-PCR用プライマーで、3Bは、2nd-PCR用プライマーです。
※ Control Sample 1, 2, 3A, 3B は、製品到着後、すぐに-20℃で保存してください。

操作方法

1. 25反応用キット

遠心操作:2回

100pg〜50ng DNA/20μLの場合
(51ng〜4ug DNA/20uLの場合):赤字の部分が異なります。
 |←2.2μL 3mol/L NaOH
 |37℃、15分
 |←220μL Reagent 1+2
 |37℃、4〜16時間(100pg〜50ngの場合)、darkまたは、55℃、4〜16時間、dark(51ng〜4μgの場合)
 |←20〜40μg グリコーゲン(または、2μL エタ沈メイト) :エタ沈メイトで問題ないことを確認しています。
 |←800μL Reagent 4
 |←1mL イソプロパノール
 |4℃、30分〜1時間
 |15,000rpm、10分〜15分、4℃
沈殿
 |←500μL 70% エタノール
 |15,000rpm、5分〜10分、4℃
沈殿
 |air dry、15分、室温
 |←5〜50μL Reagent 3(標準:20ng/μL)
 |95℃、30分(100pg〜50ngの場合) または、 72℃、1時間(51ng〜4μgの場合)
 |
PCR分析へ使用

2. 96穴プレート用キット(遠心法)

1ng〜50ng DNA/20μLの場合
(51ng〜4ug DNA/20uLの場合):赤字の部分が異なります。
遠心操作:4回

DNA:1ng〜4ug/20ulに調製
Conversion plate
 |←5μL 3mol/L NaOH
 |← 20μL DNA
 |seal
 |37℃、15分
 |←220μL Reagent 1+2
 |re-seal
 |37℃、4〜16時間(1ng〜50ngの場合)、darkまたは、55℃、4〜16時間、dark(51ng〜4μgの場合)
 |←240μL Reagent 3 
 |←20μg グリコーゲン(または、2μL エタ沈メイト)
Washing plateの上に Purification plateをセット
 |
Purification plateに移す
 |seal
 |1,000rcf、4分〜5分、室温
flow-throughを捨て、再セット
 |←0.8mL 80% イソプロパノール
 |1,000rcf、1分、室温
flow-throughを捨て、再セット
 |1,000rcf、2分、室温
Elution plateの上にPurification plateをセット
 |←50μL Reagent 4
 |室温、1〜2分
 |1,000rcf、1分、室温
Elution plateをはずしシール
 |90℃、30分(1ng〜50ngの場合)、または、72℃、1時間(51ng〜4μgの場合)
 |
PCR分析へ使用

3. 96穴プレート用キット(吸引法)

注)別途、吸引装置(マニホールド)が必要となります。

1ng〜50ng DNA/20μLの場合
(51ng〜4ug DNA/20uLの場合):赤字の部分が異なります。
吸引操作:4回

DNA:1ng〜4ug/20ulに調製
Conversion plate
 |←5μL 3mol/L NaOH
 |← 20μL DNA
 |seal
 |37℃、15分
 |←220μL Reagent 1+2
 |re-seal
 |37℃、4〜16時間(1ng〜50ngの場合)、darkまたは、55℃、4〜16時間、dark(51ng〜4μgの場合)
 |←240μL Reagent 3 
 |←20μg グリコーゲン(または、2μL エタ沈メイト)
Washing plateの上に Purification plateをセット
 |
Purification plateに移す
 |吸引、-10inHg(4.9psi):液がなくなるまで
flow-throughを捨て、再セット
 |←0.8mL 80% イソプロパノール
 |吸引、-10inHg(4.9psi):液がなくなるまで
flow-throughを捨て、再セット
 |吸引、-10inHg(4.9psi)、5分間
Washing plateを取り除き、Elution plateをセット
 |←50μL Reagent 4
 |室温、1〜2分
 |吸引、-10inHg(4.9psi)、2分間
Elution plateをはずし、色つきのplateホルダーに置き、シール
 |90℃、30分(1ng〜50ngの場合)、または、72℃、1時間(51ng〜4μgの場合)
 |
PCR分析へ使用

データ

図1.高回収率:MethylEasyTMと従来法のDNA回収率の比較


2μgのDNAを用いて、MethylEasyTMと従来法で処理を行なった後、修飾DNAの回収量をアガロースゲル電気泳動で確認した。

図2.微量DNAからのスタート:MethylEasyTM、他社キットおよび従来法の比較(25回用キット)


100pgから100ngのDNAを開始DNAとして用いて、 MethylEasyTMと競合キットおよび従来法で処理を行なった後、異なる三種の遺伝子をPCRで増幅し、その感度をアガロースゲル電気泳動で確認した。

図3. 和光のDNA抽出キットを用いて抽出したサンプルの評価

DNA Extractor WB Kit DNA Extractor SP Kitを用いて抽出したゲノムDNAを試料として実験を行なった。
DNA Extractor WB Kit:全血からのゲノムDNA抽出(健常人血液)
DNA Extractor SP Kit:血清からのゲノムDNA抽出(健常人血清)


弊社DNA抽出キットを用いて抽出したDNAは、本MethyEasyキットのスタートDNAとして問題なく使用することができることを確認した。

修飾反応

各DNA抽出キットを用いて抽出したDNA、100ngを使用し、プロトコールに従い修飾反応(55℃、16時間)を行なった。

PCR条件

各DNA 20ngを鋳型として使用し、キット添付の3A・3BプライマーによるPCR(nested-PCR)により、C(シトシン→)U(ウラシル)変換型の配列(240bp)の検出を行なった。

保存条件

室温

※ Control Sample 1, 2, 3A, 3B は、製品到着後、すぐに-20℃で保存してください。

現品説明書

  1. MethylEasyTM DNA Bisulphite Modification Kit (pdf)
  2. MethylEasyTM HighThroughput DNA Bisulphite modification kit -Centrifugation method (pdf)
  3. MethylEasyTM HighThroughput DNA Bisulphite modification kit -Vacccum Manifold Method (pdf)

文献

  1. Christel K., Taranger, A. N., Anita, L. S., Anne-Mari, H., Andrew C. B and Philippe, C : Molecular Biology of the Cell, 16, 5719(2005)
  2. Wang. J., Thompson, B., Ren, C., Ittmann, M. and Kwabi-Addo, B.: Prostate, 66, 613(2006)

関連製品

試薬

Code No. 品名 規格 容量 希望納入価格
291-50502 DNA Extractor(R) WB Kit、全血からのDNA抽出 遺伝子研究用 1キット 27,000円
296-60501 DNA Extractor(R) SP Kit、血清、血漿からのDNA抽出 遺伝子研究用 1キット 25,000円
312-01791 エタ沈メイト 0.2ml 15,000円
052-07221 Ethanol (99.5) DNase、RNase 
 分子生物学用
100ml 1,850円
054-07225 500ml 4,600円
166-21671 2-Propanol(イソプロパノール) DNase、RNase 
 分子生物学用
100ml 2,800円
168-21675 500ml 4,100円

*電気泳動法により、DNaseおよびRNase活性のチェックを行っています。その他の分子生物学用試薬は、蛍光法によりチェックしてます。
*表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
*表示している希望納入価格は2012年12月の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

ページトップへ