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正確性の高いDNAポリメラーゼ
Pho DNA Polymerase

 本品は、超好熱古細菌Pyrococcus horikoshii OT3由来の耐熱性DNAポリメラーゼです。3'→5'エキソヌクレアーゼ活性 (校正活性)を持つため、PCR増幅において正確性の高い反応を行うことが出来ます。

AE測定用標準曲線本酵素は、独立行政法人産業技術総合研究所の研究成果
(松井郁夫ら、特許第3015878号)が活用されております。

 

 

 


Pho DNA Polymerase

特長

  • 3'→5' exonucleotide活性 (Proof-reading活性)を有しているため、正確性の高いPCRが可能である。また、5'→3' exonucleotide活性は有していない。
  • 長鎖DNAを増幅可能である。
  • GC含量の高いDNAを増幅可能である。
  • PCR反応の阻害物資であるSDSの影響を受けにくい。
  • 伸長速度の目安:1 kbp/ min
  • 得られたPCR産物は平滑末端である。必要に応じてリン酸化した後、平滑末端のベクターにライゲーションできる。

製品情報

活  性 2.5 units/μl
分 子 量 80 kDa
形  状 50 mM Tris-HCl (pH 8.0)
100 mM NaCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% (v/v) Glycerol
0.1% Triton X-100
保存条件 -20℃、凍結不可

製品構成

Pho DNA polymerase
Pho DNA polymerase 250 units×1
dNTP Mixture (2.5 mM each) 800μl×2
10×Pho Reaction Buffer (10 mM Mg2+) 1.0 ml×1

活性定義

1 unitは、activated calf thymus DNAをプライマー/鋳型として、74℃、30分間に10 nmolのデオキシヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性とする。

純度

本酵素10 unitsと1 gのpBR322 DNAを74℃で、1時間反応させてもアガロースゲル電気泳動パターンに変化は認められない。

実験例

【 DNAを鋳型にした増幅 (200 bp〜20 kbp)】

AE測定用標準曲線

M1 Gene Ladder Wide 1
1 200 bp
2 500 bp
3 1 kbp
4 3 kbp
5 5 kbp
6 8 kbp
7 10 kbp
8 15 kbp
9 20 kbp
M2 Marker 1 ( λ/HindVdigest)

Pho DNA Polymeraseは200 bpから20 kbpまでのDNAを問題なく増幅した。

【阻害物質 (SDS)によるPCR反応への影響】

DNAを鋳型にした3 kbpのDNA断片の増幅を行う際に、PCR反応液中の終濃度が0.01%、0.005%、0.001%になるようにSDSを添加した。PCR反応は各酵素の至適条件で行った。

AE測定用標準曲線

1 SDS 0.01%
2 SDS 0.005%
3 SDS 0.001%
4 SDS なし
M Gene Ladder Wide 1

※PCR反応は各酵素の至適条件で行った。

 

Pho DNA Polymeraseは他社DNAポリメラーゼでは増幅困難なSDS 0.01%を含むサンプルでもDNAを増幅した。

【GC-rich な領域の増幅】

HeLa細胞のゲノムDNAを鋳型としApoE遺伝子の577 bp (GC含量72%)の領域を増幅した。増幅の際にBetaine (終濃度 0.5 M, 1 M, 1.5 M, 2 M)、DMSO (終濃度2.5%, 5%, 10%)、Formamide (終濃度2.5%, 5%, 10%)をそれぞれ反応液に添加した。

AE測定用標準曲線

M Gene Ladder 100
C Control
1 Betaine 0.5 M
2 Betaine 1.0 M
3 Betaine 1.5 M
4 Betaine 2.0 M
5 DMSO 2.5%
6 DMSO 5.0%
7 DMSO 10.0%
8 Formamide 2.5%
9 Formamide 5.0%
10 Formamide 10.0%

本試験では、Pho DNA PolymeraseはFormamide 5.0%で特異的に目的のDNA断片の増幅ができた。

コードNo. 品 名 容 量 希望納入価格(円)
314-07111 Pho DNA Polymerase 250 units \27,500

*表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
*表示している希望納入価格は2012年12月の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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