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分裂酵母形質転換用試薬
S. pombe Direct Transformation Kit Wako

ゲノムワイドなスクリーニングに対応!!
菌の遠心・洗浄が不要!加えるだけ!

製品概要

S. pombe Direct Transformation Kit Wako は、分裂酵母(Schizosaccharomyces pombe)を形質転換させるための試薬キットです。
わずらわしい菌体の遠心・洗浄操作をすることなく、目的プラスミドと専用試薬の混合液を、酵母培養液に直接加えるだけの簡単な操作で、形質転換を行うことができます。
特に、96ウェルマイクロプレートを用いた多検体への同時処理が簡単に行えるため、これまで困難であったお手持ちの遺伝子破壊株を用いたゲノムワイドスクリーニングが可能となります。

特長

  • 菌体の遠心・洗浄が不要
  • 目的プラスミドDNAと専用試薬を加えるだけのワンステップタイプ
  • 96ウェルマイクロプレートで導入できるため、多検体処理が可能
  • チューブ法でも導入が可能
  • ハイスループット向けに分注しやすい低粘性試薬

96ウェルマイクロプレートを用い、プロトールに従いS. pombe(Leucine合成酵素欠損株)にプラスミド(Leucine合成酵素発現マーカー)導入後、SD培地(-Leucine)にプレーティングし、培養した。

形質転換効率

250cfu/μg以上

※高い形質転換効率(5×103程度)をお求めの場合は、高効率形質転換プロトコール(チューブ法)をご参照下さい。
  但し、遠心分離が必要となりますので、操作の簡便性は低くなります。

コード No. 品名 規格 容量 希望納入価格(円)
290-64301
296-64303
294-64304
S. pombe Direct Transformation Kit Wako 遺伝子研究用
20回用
100回用
500回用
8,000円
25,500円
45,000円

*表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
*表示している希望納入価格は2012年12月の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

キット内容

  20回用 100回用 500回用
Sp Transformation Reagent 2.25ml×1本 11.5ml×1本 57ml×1本
Carrier DNA (5mg/ml) 0.1ml×1本 0.5ml×1本 1.25ml×2本

使用回数

  20回用 100回用 500回用
チューブ法
20チューブ
100チューブ
500チューブ
96ウェルマイクロプレート法
-
1プレート (100ウェル分)
5プレート (500ウェル分)

 

操作方法

■96ウェルマイクロプレート法

96ウェルマイクロプレート
 |←YES培地 25μl/ウェル
 |←コロニー※1)を植菌
 |静置培養, 28-30℃,18-24時間
 |菌体懸濁(プレートミキサー)
 |←プラスミド・試薬混合液※2) 100μl/ウェル
 |混合(プレートミキサー)
 |インキュベート, 46℃, 2時間
スポッティング 10μl/ウェル
 |インキュベート, 28-30℃, 5-7日
形質転換酵母

※1) 菌体コロニーは、YPD寒天培地で培養して準備して下さい。YES寒天培地を用いると形質転換効率が低下する傾向があります。
    準備したコロニー(プレート)は、冷蔵で1ヶ月間保存しても形質転換効率に影響しません。
※2) プラスミド・試薬混合液の調製
Sp Transformation Reagent  90μl
・プラスミドDNA            1μg
・Carrier DNA             4μl
滅菌水で100μlに調製する。
(多検体を処理する場合は、必要量調製する。)

■チューブ法

<酵母の培養>
YES液体培地 2ml
 |←コロニー※1)を植菌
YES液体培地でOD600:0.2に調製
 |
1mlを14ml容ツーポジションチューブに移す
 |振とう培養, 28-30℃, OD600:6.0-7.0まで※2)
培養酵母・・・・・(A)※3)

<形質転換>
1.5ml容マイクロチューブ
 |←プラスミド・試薬混合液※4) 100μl
 |←培養酵母(A) 25μl
 |インキュベート, 37℃, 2時間
プレーティング
 |インキュベート, 28-30℃, 5-7日
形質転換酵母

※1) 菌体コロニーは、YPD寒天培地で培養して準備して下さい。YES寒天培地を用いると形質転換効率が低下する傾向があります。
    準備したコロニー(プレート)は、冷蔵で1ヶ月間保存しても形質転換効率に影響しません。
※2) 菌体濃度が形質転換効率に大きく影響しますので、必ずOD600値を確認して下さい。
※3) 形質転換、約30回分の酵母が準備できます。
※4) プラスミド・試薬混合液の調製
   ・Sp Transformation Reagent  90μl
   ・プラスミドDNA            1μg
   ・Carrier DNA             4μl
   滅菌水で100μlに調製し、ボルテックスミキサーで混合する。

応用例

高効率形質転換プロトコール(チューブ法)

チューブ法プロトコールで酵母培養液を遠心操作により5倍濃縮して用いると、形質転換効率を5倍程度上昇させることができます。

<酵母の培養>
YES液体培地 2ml
 |←コロニーを植菌
YES液体培地でOD600:0.2に調製
 |
1mlを14ml容ツーポジションチューブに移す
 |振とう培養, 28-30℃, OD600:6.0-7.0まで
 |

 |
遠心分離 500×G, 5分間, 室温
 |
上清を800μl除去
 |懸濁(ボルテックスミキサー)
 |


5倍濃縮

 |
培養酵母・・・・・(A)

<形質転換>
1.5ml容マイクロチューブ
  |←プラスミド・試薬混合液 100μl
  |←培養酵母(A) 25μl
  |インキュベート, 37℃, 2時間
プレーティング
  |インキュベート, 28-30℃, 5-7日
形質転換酵母

保存条件

-20℃
注)凍結融解は10回までにして下さい。凍結融解を避けるため、あらかじめ小分け分注して-20℃保存することをお奨めします。

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コードNo.
品名
容量
希望納入価格
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*表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
*表示している希望納入価格は2012年12月の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

分子生物学用にDNase、RNaseをチェックした試薬をご用意しております。
ご興味のある方は、こちらをご参照下さい。

出芽酵母形質転換用試薬 S. cerevisiae Direct Transformation Kit Wako もございます。

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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