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NPGロゴ簡単・迅速なライゲーションキット
Ligation Convenience Kit

 本品は、DNAライゲーションを迅速、簡単に行うことができるキットです。2×Ligation Mixには、DNAライゲーションに必要な反応バッファー、ATP、DTT、T4 DNA Ligaseなどが全て含まれており、DNA溶液と等量の2×Ligation Mixを加えるだけでDNAライゲーション反応を行うことができます。
 本キットを使用することで、DNAの末端形状に関わらず5〜30分間 (16℃)でDNAライゲーションを行うことができ、反応が終了したDNA溶液はそのまま形質転換やin vitroパッケージングに使用することができます。

特長

1) 短時間 (5〜30分間、16℃)で高効率なDNAライゲーションが可能
2) DNA溶液と等量の2×Ligation Mixを混ぜるだけの実験操作が簡単な1液タイプ
3) DNA末端形状の違いによる条件検討が不要
4) 反応終了液をそのまま形質転換に使用可能
5) 標準反応スケールは20 μl
6) 50回までの凍結融解による反応効率の低下が無い

マニュアル

第四版 (2005年12月26日)

使用法

1.適切なモル比のベクターDNAとインサートDNAを混合し、ddH2Oで10 μlにメスアップする。
2.DNA溶液に10 μlの2×Ligation Mixを加え、混合する。
3.16℃で5〜30分間反応させる。
4.反応終了液をそのまま形質転換やin vitroパッケージングに使用する。

実験例

【平滑末端ライゲーションでの性能比較】
一般的にLigation効率が悪いとされる平滑末端Ligation反応での白コロニー率 (Ligation効率)、コロニー数 (Ligation効率および形質転換効率)について、Ligation-Convenience KitおよびA社製品、B社製品の比較を行いました。

【方法】
1.pBluescriptU SK (+)をEcoR Xで切断し、脱リン酸化、除タンパク後にTEバッファーに溶解した。
2.λDNA由来のDNA断片 500bpをEcoR Xで切断した。
3.pBluescriptU SK (+) 50 ngとインサートDNA断片 20 ng (インサート/ベクターモル比=1:2.4)を含むDNA溶液 10 μlを調製した。
4.DNA溶液 10 μlに2×Ligation Mixを 10 μlを添加し、混和後、16℃で5〜60分間反応させた。
 反応後、JM109コンピテントセル 50 μlを反応液 5 μlで形質転換し、生じたコロニー数を計測した。
 また、比較したキットについてはそれぞれのキットのプロトコルに従って反応を行った。

Agarose 21

【結果】
Ligation Convenience Kitでは、一般的にLigation効率が悪いとされる平滑末端でのLigation反応でも、白コロニー率 (Ligation効率)、コロニー数 (Ligation効率および形質転換効率)ともに良好な結果が得られた。また、反応時間は5分間で十分であった。

ベクター:インサートモル比の検討

ライゲーションの際のベクター:インサートモル比は、ライゲーション効率に大きく影響します。Ligation Convenience Kitを使用し、様々な長さのインサートDNAをライゲーション、形質転換した結果、それぞれの条件で最も良い結果が得られたモル比は以下の通りになりました。

【プラスミドライゲーション】

粘着末端 インサート長 200 bp 600 bp 1000 bp 3000 bp ・ベクター:EcoRTで切断したpUC19 (0.03 pmol)
・インサート:EcoRTで切断したインサートDNA
 (0.015, 0.03, 0.06, 0.15, 0.3 pmol)
・ライゲーション反応:16℃、5分間
ベクター 1 1 1 1
インサート 10 5〜10 2〜10 0.5〜2
平滑末端 インサート長 200 bp 600 bp 1000 bp 3000 bp ・ベクター:SmaTで切断したpUC19 (0.03 pmol)
・インサート:SmaTで切断したインサートDNA
 (0.015, 0.03, 0.06, 0.15, 0.3 pmol)
・ライゲーション反応:16℃、5分間
ベクター 1 1 1 1
インサート 5 5 2〜10 0.5〜2
TAクロー
ニング
インサート長 200 bp 600 bp 1000 bp 3000 bp ・ベクター:pGEMR-T Easy (Promega社) (0.03 pmol)
・インサート:Gene Taq NTで増幅したPCR産物
 (0.015, 0.03, 0.06, 0.15, 0.3 pmol)
・ライゲーション反応:16℃、5分間
ベクター 1 1 1 1
インサート 10 5 5 1

【リンカーライゲーション】

リンカーライ
ゲーション
インサート長 8 bp ・ベクター:HincUで切断したpUC19 (0.03 pmol)
・インサート:LinkerEcoRVで切断したインサートDNA
 (0.3, 1.5, 3, 15 pmol)
・ライゲーション反応:16℃、5分間
ベクター 1
インサート 50以上

価格表

コードNo. 品 名 容 量 希望納入価格(円)
319-05961 Ligation Convenience Kit 100回分 20,000
315-05963 10回分 3,200

*表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
*表示している希望納入価格は2012年12月の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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*表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
*表示している希望納入価格は2012年12月の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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