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高温条件下での一本鎖DNAライゲーションに!
一本鎖DNAリガーゼ,耐熱性,組換え体,溶液

本品は、好熱性ファージ由来の一本鎖DNAリガーゼです。一本鎖DNAまたはRNAの5’-P末端と3’-OH末端をりん酸ジエステル結合させます。至適温度は60-65℃であり、熱に対して安定です。高温条件下にてT4 RNAリガーゼより高いライゲーション効率が得られます。

特長

  • 高い熱安定性
  • 至適温度:60-65℃
  • 高いライゲーション効率
  • 一本鎖RNAのライゲーションも可能

概要

由    来 : E. coli expressed thermophilic phage TS2126 single strand DNA ligase
形    状 : 10mmol/l Tris(pH 8.0), 50mmol/l KCl, 0.1mmol/l EDTA, 1mmol/l DTT and 50% Glycerol
至 適 温 度 : 60-65℃
活    性 : ラベルに表示(約10units/μl)
活性の定義  : 60℃で1時間に10pmolの5’-d(N85)をエキソヌクレアーゼT耐性に変換させる酵素量を1unitとする。

構成

  200units 500units
Single Strand DNA Ligase, thermostable, recombinant, Solution 200units×1本 500units×1本
10×Reaction Buffer※ 0.5ml×1本 0.5ml×1本

※10×Reaction Buffer : 500mmol/l MOPS(pH 7.5), 10mmol/l DTT, 50mmol/l MgCl2 and 100mmol/l KCl

 

コードNo. 品名 規格 容量 希望納入価格(円)
298-65103 Single Strand DNA Ligase, thermostable, recombinant, Solution 遺伝子研究用 200units 43,000
292-65101 500units 87,000

*表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
*表示している希望納入価格は2012年12月の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

 

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特長

  • 耐熱性リガーゼによる高効率で正確なアダプターライゲーションが可能
  • ヘアピン型microRNAのクローニングに最適
  • RNA操作が少なく1.5 日でmicroRNAをコードするcDNAが作製可能

使用例

HeLa細胞に発現しているmicroRNAのクローニング

  1. HeLa細胞(1×107 cells) より ISOGENにてTotal RNAを抽出。
  2. Total RNA からSmallRNA画分をカラム抽出し、15% 変性アクリルアミドゲルにて200nt以下のSmallRNA画分を電気泳動後、20〜23nt付近を切り出し抽出。
  3. microRNA Cloning Kit WakoでmicroRNAをコードするcDNAを合成し、T-ベクターにクローニング。
  4. 大腸菌へT-ベクターを導入し、抗生物質を含むLB寒天培地にて形質転換体を選抜。
    (本実験では青白コロニー選抜は行っておりません)
  
microRNAの種類 クローン数
has-miR-23a 38
has-miR-92a 16
has-miR-22 5
has-miR-25 5
has-miR-23b 3
has-miR-19b 1
has-miR-21 1
has-miR-210 1
合計 70

本キットでクローニングしたsmall RNA

ランダムに選抜した96クローンよりプラスミドを抽出し、塩基配列を解析した後、データベース(Sanger miRNA Registry)と照合したところ、96クローン中、70クローン(全体の73%)がmicroRNAであることを確認した。これにより、非常に高効率にmicroRNAのクローニングが可能であることが示唆された。

詳しくは、弊社HP (http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/info/gene/article/microRNACKit.htm) をご参照下さい。

コードNo. 品名 規格 容量 希望納入価格(円)
290-66501 microRNA Cloning Kit Wako 遺伝子研究用 8回用 63,000

*表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
*表示している希望納入価格は2012年12月の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

※本キットには、耐熱性リガーゼおよびPCR用の耐熱性DNAポリメラーゼは含まれておりません。
※耐熱性リガーゼは、必ず一本鎖DNAリガーゼ, 耐熱性, 組換え体, 溶液(298-65103、292-65101)をご使用下さい。1キットに200units必要です。

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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