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高温条件下での一本鎖DNAライゲーションに！
一本鎖DNAリガーゼ，耐熱性，組換え体，溶液

本品は、好熱性ファージ由来の一本鎖DNAリガーゼです。一本鎖DNAまたはRNAの5’-P末端と3’-OH末端をりん酸ジエステル結合させます。至適温度は60-65℃であり、熱に対して安定です。高温条件下にてT4 RNAリガーゼより高いライゲーション効率が得られます。

特長

• 高い熱安定性
• 至適温度：60-65℃
• 高いライゲーション効率
• 一本鎖RNAのライゲーションも可能

概要

由　　　　来　： E. coli expressed thermophilic phage TS2126 single strand DNA ligase
形　　　　状　： 10mmol/l Tris(pH 8.0), 50mmol/l KCl, 0.1mmol/l EDTA, 1mmol/l DTT and 50% Glycerol
至 適 温 度　： 60-65℃
活　　　　性　： ラベルに表示（約10units/μl）
活性の定義　 ： 60℃で1時間に10pmolの5’-d(N85)をエキソヌクレアーゼ�T耐性に変換させる酵素量を1unitとする。

構成

※10×Reaction Buffer ： 500mmol/l MOPS(pH 7.5), 10mmol/l DTT, 50mmol/l MgCl2 and 100mmol/l KCl

記載希望納入価格は本体価格であり、消費税などが含まれておりません。

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microRNAクローニングキットワコー

熱による不活性化が容易なエビ由来アルカリホスファターゼ（SAP）の脱りん酸反応と、一本鎖DNA・RNAを高効率に連結可能な耐熱性リガーゼによるアダプターライゲーション反応とを、同一溶液中で行うことが可能にした、簡便かつ高効率なmicroRNAクローニングキットです。

特長

• 耐熱性リガーゼによる高効率で正確なアダプターライゲーションが可能
• ヘアピン型microRNAのクローニングに最適
• RNA操作が少なく1.5 日でmicroRNAをコードするcDNAが作製可能

使用例

HeLa細胞に発現しているmicroRNAのクローニング

1. HeLa細胞（1×107 cells） より ISOGENにてTotal RNAを抽出。
2. Total RNA からSmallRNA画分をカラム抽出し、15% 変性アクリルアミドゲルにて200nt以下のSmallRNA画分を電気泳動後、20〜23nt付近を切り出し抽出。
3. microRNA Cloning Kit WakoでmicroRNAをコードするcDNAを合成し、T-ベクターにクローニング。
4. 大腸菌へT-ベクターを導入し、抗生物質を含むLB寒天培地にて形質転換体を選抜。
   （本実験では青白コロニー選抜は行っておりません）

本キットでクローニングしたsmall RNA

ランダムに選抜した96クローンよりプラスミドを抽出し、塩基配列を解析した後、データベース(Sanger miRNA Registry)と照合したところ、96クローン中、70クローン（全体の73%）がmicroRNAであることを確認した。これにより、非常に高効率にmicroRNAのクローニングが可能であることが示唆された。

詳しくは、弊社HP (http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/info/gene/article/microRNACKit.htm) をご参照下さい。

※本キットには、耐熱性リガーゼおよびPCR用の耐熱性DNAポリメラーゼは含まれておりません。
※耐熱性リガーゼは、必ず一本鎖DNAリガーゼ, 耐熱性, 組換え体, 溶液（298-65103、292-65101）をご使用下さい。1キットに200units必要です。

記載希望納入価格は本体価格であり、消費税などが含まれておりません。