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CRISPR/Cas9を用いたゲノム編集用gRNA合成キット
CUGA®7 gRNA Synthesis Kit

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CUGA®7 gRNA Synthesis Kitは、CRISPR/Cas9システムを用いたゲノム編集に必要なガイドRNAを合成・精製するためのキットです。
in vitro 転写反応に、CUGA® 7ポリメラーゼ(独自開発したT7 RNA Polymeraseの変異体)を用いることで、目的のガイドRNAを正確かつ大量に調製することができます。本キットには、in vitro 転写反応用試薬およびスピンカラムを用いたガイドRNA精製用試薬が含まれています。


リンク関係


特長

  • in vitro 転写反応でgRNAを大量に合成可能
  • 独自開発した酵素による正確な転写
  • 化学合成したgRNAと同等に機能

キット構成

<ガイドRNA合成用試薬>
CUGA® 7 Enzyme Solution ・・・・・・ 50 µL x 1本
・5xTranscription Buffer ・・・・・・・・ 200 µL x 1本
・0.1 M DTT ・・・・・・・・・・・・・・ 100 µL x 1本
・NTP Mix ・・・・・・・・・・・・・・・ 300 µL x 1本
・DNase I (RNase free) ・・・・・・・・・ 100 µL x 1本
   
<ガイドRNA精製用試薬とスピンカラム> 
・gRNA Binding Buffer ・・・・・・・・・ 30 mL x 1本
・gRNA wash Buffer ・・・・・・・・・・ 40 mL x 1本
・Spin Column ・・・・・・・・・・・・・ 50 本 x 1袋
・ddWater(RNase free) ・・・・・・・・・ 1 mL x 5本

※注意
in vitro転写反応に必要な鋳型DNAおよび鋳型DNA調製用試薬は 本品に含まれておりませんので、別途ご用意頂く必要があります。

実験の流れ

実験例

@ RNA合成量の比較

CUGA®7 gRNA Synthesis Kit(本品)およびA社gRNA合成キット(in vitro 転写法)を用いて37℃, 1時間〜4時間の条件でsingle guideRNA(sgRNA)の合成を行った。反応後、各社マニュアルにしたがってsgRNAを精製し、合成量を比較した。


【結果】
 本品は、A社と比べて約3倍のsgRNAを合成することができた。


A 電気泳動による比較

本品およびA社 gRNA合成キットを用いてsgRNAを合成し、精製後のsgRNAをアガロースゲル電気泳動により比較した。


【実験条件】
・泳動サンプル : 37℃, 2時間の反応で合成したsgRNA 250 ng
・電気泳動ゲル : 3% Agarose 21
・2×Loading Buffer組成 : 95% ホルムアミド
             0.5 mM EDTA
             0.005% BPB
             0.005% XC


【結果】
 本品で合成したsgRNAは、電気泳動において単一バンドで、正確に合成できていることが
 確認できた。

 

B in vitroでの切断チェック(化学合成品との比較)

本品で合成したsgRNAと化学合成gRNA(tracrRNA、crRNA)を in vitroで切断チェックした。


【実験条件】
・M : GeneLadder Fast2 5 µL
・C : Control
・1 : Cas9 Nuclease protein NLS 2 pmol + 化学合成gRNA 2 pmol
・2 : Cas9 Nuclease protein NLS 2 pmol + 本品で合成したsgRNA 50 ng
・電気泳動ゲル : 0.8% Agarose S


【結果】
 本品で合成したsgRNAは化学合成品と同等に機能することが確認できた。

価格表

コードNo. 品名 容 量 希望納入価格(円)
314-08691 CUGA®7 gRNA Synthesis Kit 50回用 54,000

in vitro転写反応に必要な鋳型DNAおよび鋳型DNA調製用試薬は本品に含まれていませんので、別途ご用意して頂く必要があります。



refrigerator・・・2〜10℃保存   freeze・・・-20℃保存   -80 degree C・・・-80℃保存   表示がない場合は室温保存です。
特定毒物・・・特定毒物   毒物1 毒物2・・・毒物   劇物1 劇物2 劇物3・・・劇物   毒薬・・・毒薬   劇薬・・・劇薬   危険物・・・危険物   向精神薬・・・向精神薬
特定麻薬向精神薬原料・・・特定麻薬向精神薬原料   化審法 第一種特定化学物質・・・化審法 第一種特定化学物質   化審法 第二種特定化学物質・・・化審法 第二種特定化学物質
化学兵器禁止法 第一種指定物質・・・化学兵器禁止法 第一種指定物質   化学兵器禁止法 第二種指定物質・・・化学兵器禁止法 第二種指定物質
カルタヘナ・・・カルタヘナ   覚せい剤取締法・・・覚せい剤取締法   国民保護法・・・国民保護法

*上記以外の法律および最新情報は、siyaku.com(http://www.siyaku.com/)をご参照下さい。

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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