和光純薬工業株式会社 試薬 [Laboratory Chemicals] 試験研究用試薬・抗体の製造販売および各種受託サービス
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エクソソームの高感度定性解析に最適
PS Capture™ Exosome Flow Cytometry Kit

本品は、ホスファチジルセリン(PS)特異的に結合するTim4タンパク質と磁気ビーズを利用したPSアフィニティー法※1によって、細胞外小胞を磁気ビーズ上に固定化し、表面マーカータンパク質をフローサイトメトリー(FCM)によって高感度に検出できます。

ご使用前に各表面マーカータンパク質に対する蛍光色素標識一次抗体、または一次抗体及び蛍光色素標識二次抗体をご用意いただく必要があります。


※1 参考文献:
“A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles”, W. Nakai, T. Yoshida, D. Diez, Y. Miyatake, T. Nishibu, N. Imawaka, K. Naruse, Y. Sadamura & R. Hanayama, Sci Rep 6, 33935 (2016).


リンク関係


特長

  • FCMによる高感度定性解析
  • 磁気ビーズによる簡単操作
  • 検体を直接検出可能(精製不要)
  • 単離から染色まで 3 時間で完了

測定原理


対応サンプル・キット内容

  • 細胞培養上清
  • 血清
  • 血漿(ヘパリンまたは EDTA)

キット構成(300回用) 容量
Exosome Capture Beads 3 mL × 1 本
Washing Buffer (10×) 45 mL × 2 本
Exosome Binding Enhancer (100×) 15 mL × 1 本

操作概要 基本プロトコール(2反応分)


各種サンプルの前処理フロー

細胞培養上清の場合

EDTA血漿の場合



血清・ヘパリン血漿の場合

※EDTA 血漿サンプルの場合、サンプルに含まれる EDTA が細胞外小胞と Exosome Capture Beads の結合を阻害するので、事前にサンプルバッファーの交換を行ってください。
Vivaspin20 の分画分子量 100K (Sartorius 社, Code: VS2041)と 50mL の TBS が必要です。

バッファー交換(限外濾過)プロトコール

50 mLの TBS バッファーを用いて 1 mLの遠心処理済み EDTA 血漿サンプルのバッファー交換を行います。

  1. 19mL の TBS を Vivaspin20 (100K) に添加する。
  2. 1mL の遠心処理済み EDTA 血漿上清画分を 1.の Vivaspin20 (100K)に添加し混合する。
  3. 2.の Vivaspin20 (100K)を 4℃で遠心処理する。
  4. 上部の液が減ってきたら 10mL の TBS を Vivaspin20 (100K)に追加する。
  5. 4℃で遠心分離処理する。
  6. 上部の液が減ってきたら 10mLの TBS を Vivaspin20 (100K)に追加する。
  7. 4℃で遠心分離処理する。
  8. 上部の液が減ってきたら 11mL の TBS を Vivaspin20 (100K)に追加する。
  9. サンプル液量が 1mL 以下になるまで 4℃で遠心処理する。
  10. 精製ステップへ進む。

各反応数における試薬およびサンプル使用量

細胞外小胞の単離工程では、1.5mL 容マイクロチューブを用いた反応系(2 反応分)を基本プロトコールに設定しています。

反応スケールを大きくする場合、Exosome Capture Beads 使用量、サンプル量を右の表に従いスケールアップする必要があります。

※1.5mL 容マイクロチューブ1本あたり、10 反応分が最大になります。


反応数 Exosome Capture Beads (µL) サンプル量(µL)
2 反応分
(基本)
30 100
3 反応分 40 133
4 反応分 50 167
5 反応分 60 200
6 反応分 70 233
7 反応分 80 267
8 反応分 90 300
9 反応分 100 333
10 反応分 110 367

K562 細胞培養上清に含まれるエクソソームの表面抗原解析

K562 細胞培養上清に含まれるエクソソームを、本品および他社品(抗 CD81, CD9, CD63 抗体固相化磁気ビーズ)により単離し、蛍光標識抗 CD63、CD9、CD81 抗体を結合させた後、フローサイトメトリーによりエクソソーム表面抗原の検出を行った。

■サンプル
K562 細胞培養上清 33 µL/Assay

■検出抗体
PE 標識抗 CD63 抗体(Code:556020, BD Biosciences社)
PE 標識抗 CD9 抗体(Code:NB100-77915PE, Novus Biologicals社)
PE 標識抗 CD81 抗体(Code:NBP1-44861PE, Novus Biologicals社)


いずれの検出抗体を用いた場合も、PS Capture™ Exosome Flow Cytometry Kit は他社品に比べて、エクソソーム表面抗原を高感度に検出できることが確認できた。

血清、血漿に含まれるエクソソームの表面抗原解析

ヒト血清、ヒト血漿(EDTA 血漿、ヘパリン血漿)に含まれるエクソソームを磁気ビーズ上に固定化し、PE 標識マウス IgG アイソタイプコントロールおよび PE 標識抗ヒト CD9 抗体によりエクソソームの検出を行った。

■サンプル
ヒト血清、ヘパリン血漿、EDTA 血漿(バッファー交換済み)33 µL/Assay

■検出抗体
PE 標識抗 CD9 抗体(Code:NB100-77915PE, Novus Biologicals社)


いずれのサンプルも、PE 標識抗ヒト CD9 抗体で染色した場合に、蛍光強度ピークのシフトが確認できた。

価格表

コードNo. 品 名 容 量 希望納入価格(円)
297-79701 freezePS Capture™ Exosome Flow Cytometry Kit 300 回用 30,000

*本キットは体外診断用ではありません。
*希望納入価格には消費税等が含まれておりません。


refrigerator・・・2〜10℃保存   freeze・・・-20℃保存   -80 degree C・・・-80℃保存   表示がない場合は室温保存です。
特定毒物・・・特定毒物   毒物1 毒物2・・・毒物   劇物1 劇物2 劇物3・・・劇物   毒薬・・・毒薬   劇薬・・・劇薬   危険物・・・危険物   向精神薬・・・向精神薬
特定麻薬向精神薬原料・・・特定麻薬向精神薬原料   化審法 第一種特定化学物質・・・化審法 第一種特定化学物質   化審法 第二種特定化学物質・・・化審法 第二種特定化学物質
化学兵器禁止法 第一種指定物質・・・化学兵器禁止法 第一種指定物質   化学兵器禁止法 第二種指定物質・・・化学兵器禁止法 第二種指定物質
カルタヘナ・・・カルタヘナ   覚せい剤取締法・・・覚せい剤取締法   国民保護法・・・国民保護法

*上記以外の法律および最新情報は、siyaku.com(http://www.siyaku.com/)をご参照下さい。


掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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