和光純薬工業株式会社試薬 [Laboratory Chemicals] 試験研究用試薬・抗体の製造販売および各種受託サービス
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イメージ VEGFファミリーは血管新生において重要な役割を担うサイトカインで、異なる遺伝子にコードされるVEGF-A,VEGF-B,VEGF-C,VEGF-D,VEGF-E, PLGF -1及びPLGF-2 の7種類が知られています。
なかでも、VEGF-A は最も強力な作用を示し、選択的スプライシングにより121,165,189アミノ酸タイプのサブタイプが存在することが知られています。
VEGF-A165はサブタイプの中で、最も多く存在し、腫瘍血管を誘導する効率も高いことが知られており、種々の癌において、予後の悪化と強く関係することが示されています。
また、関節リウマチ、動脈硬化、網膜症、POEMS症候群などの疾患との相関も報告されています。


リンク関係


特長

  • カルタヘナ法非該当(バキュロウイルス不含)
  • 正常血清/血漿検体でも測定可能
  • 短時間(総反応時間4時間50分)
  • 微量検体(〜100μL)
  • 高感度測定(1.10 pg/mL〜)

製品情報

イメージ ■検体
ヒト血清
ヒト血漿(ヘパリン/EDTA)

■標準曲線範囲
1.10〜800 pg/mL

■キットの構成
(A)抗体固相化96ウェルプレート・・・・・・・・96ウエル(8×12)/1枚
(B)ヒトVEGF165標準品・・・・・・・・・・・・ 1μg/1本
(C)緩衝液・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 60mL /1本
(D)ビオチン結合抗VEGF抗体・・・・・・・・・・・・ 1本
(E)ペルオキシダーゼ・アビジン結合物・・・・・ 100μL /1本
(F)発色液(TMB)・・・・・・・・・・・・・・・ 12mL /1本
(H)反応停止液(1M H2SO4) ・・・・・・・・・ 12mL /1本
(I)濃縮洗浄液(10×)・・・・・・・・・・・・ 100mL /1本


精度試験(アッセイ内変動)

n / ID Sample1(pg/mL) Sample2(pg/mL)
1 29.7 37.8
2 28.3 36.5
3 27.7 35.0
4 29.3 35.4
5 28.8 35.4
mean 28.8 36.0
SD 0.79 1.1
CV(%) 2.8 3.2

2濃度の血清検体を5重測定し精度を確認した

再現性試験(アッセイ間変動)

Day / ID Sample1
(pg/mL)
Sample2
(pg/mL)
Sample3
(pg/mL)
0日目 279 86.1 11.9
1日目 271 84.5 12.5
2日目 268 88.5 11.2
3日目 269 88.1 11.5
mean 272 86.8 11.8
SD 5.0 1.9 0.56
CV(%) 1.8 2.1 4.8

3濃度の血清検体を4日間3重測定し精度を確認した

添加回収試験

 血清検体
添加量
(pg/mL)
実測値
(pg/mL)
回収量
(pg/mL)
回収率
(%)
0 50.6 - -
89.0 145 94.4 106
189 237 186 98.4
388 456 405 104
 
 血漿検体
添加量
(pg/mL)
実測値
(pg/mL)
回収量
(pg/mL)
回収率
(%)
0 42.1 - -
97.5 134 91.9 94.3
197 240 198 100
396 420 378 95.5

3濃度の標準品を血清検体および血漿検体に添加し、添加回収試験を行い回収率を確認した。

希釈直線性試験

血清

血漿


キット緩衝液を用いて倍々希釈した2濃度の血清検体および血漿検体を測定し,直線性を確認した

検体測定(例)

ヒト正常検体(血清、EDTA血漿、ヘパリン血漿)測定結果



ヒト正常血液検体(血清、EDTA血漿、ヘパリン
血漿:同一ドナーではない)を、各々10検体ずつ測定に供した。

(実施例の結果)
血清(10/10検出) 4.8〜28.1pg/mL
EDTA血漿(10/10検出) 13.0〜22.1pg/mL
ヘパリン血漿(8/10検出) ND、1.8〜23.1pg/mL

検出感度が高いため、数pg/mLのVEGFを定量検出できた。

操作法

抗体固相化96ウェルプレート  
 ↓  
洗浄4回  
 ↓  
希釈検体又は標準溶液 100µL
 ↓  
攪拌、室温、2時間静置反応  
 ↓  
洗浄4回  
 ↓  
ビオチン結合抗VEGF抗体 100µL
 ↓  
攪拌、室温、2時間静置反応  
 ↓  
洗浄4回  
 ↓  
ペルオキシダーゼ・アビジン結合物 100µL
 ↓  
攪拌、室温、30分間静置反応  
 ↓  
洗浄4回  
 ↓  
発色液(TMB) 100µL
 ↓  
攪拌、室温、20分間静置反応  
 ↓  
反応停止液(1M H2SO4 100µL
 ↓  
攪拌  
 ↓  
吸光度測定(主波長450nm、副波長620nm)  

室温:20〜25℃

標準曲線(例)

イメージ

プレートリーダーはInfinite f200(Tecan)を使用
演算処理は3次多項式を使用



■精度

アッセイ内変動試験
(5重測定、2検体)
C.V.値は15%未満
アッセイ間変動試験
(3重測定、3検体、4日間)
C.V.値は15%未満


価格表

コードNo. メーカーコード 品 名 標準曲線範囲 希望納入価格(円)
631-40831 AKH-VEGF レビス® Human VEGF ELISA Kit 1.10〜800 pg/mL 58,000

 

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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