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新規アフィニティー分子によるエクソソーム精製キット
MagCapture™
Exosome Isolation Kit PS

リンク関係


膜表面のホスファチジルセリン(PS)に対するアフィニティー法

アフィニティー法

ホスファチジルセリン(PS)結合分子を用いて細胞外小胞を金属イオン依存的に捕捉した後、キレート剤により溶出します。

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS 特長

新規アフィニティー
精製法採用

PSアフィニティー分子による回収※
低バックグラウンド
キレート剤により中性条件下でマイルドに溶出

※抗体による従来アフィニティー精製法よりもエクソソームが 高収量であることを確認しています。

高純度・インタクトエクソソームを単離

超遠心分離不要

マグネティックビーズによる操作性アップ
最適化されたプロトコール

高い実験再現性


他の精製方法との比較
方法 純度 エクソソーム回収量 インタクト粒子の取得
MagCapture™ (PSアフィニティー法) ■■■
超遠心分離法 ■■
ポリマー沈殿法 × ■■■■
表面抗原アフィニティー法(抗体使用) ×
対象サンプル:細胞培養上清、血清、血漿、尿など



コードNo. 品 名 容 量 希望納入価格(円)
299-77603 refrigerator MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS 2回用*1 20,000
293-77601 10回用*1 80,000

*1 使用した磁気ビーズを4回まで再生利用可能です。バッファー類も十分量同梱されています。同一サンプルからの繰り返し抽出 やコンタミネーションしないケースの場合、最大50回使用可能な製品となっています。ご検討下さい。

ヒト血清から単離したエクソソームの収量比較

ヒト血清サンプルから本キット、超遠心分離法および表面抗原に対する抗体アフィニティー法によりエクソソームを回収し、ウェスタンブロット(抗CD9抗体、抗CD63抗体)により検出を行った。

ヒト血清から単離したエクソソームの収量比較 レーン1.:超遠心分離法
レーン2.:MagCapture™
レーン3.:A社 Exosome抽出キット(CD9)
レーン4.:A社 Exosome抽出キット(CD63)
レーン5.:A社 Exosome抽出キット(CD81)
レーン6.:A社 Exosome抽出キット(CD9, CD63, CD81, EpCAM抗体ビーズ混合)
■WBのデータについて
各サンプル結果は、150μLの血清サンプルに相当します。
抽出物(100μL)から15μL抜き取り、4×SDSサンプルバッファーを5μL添加し、全量アプライしました。

従来の沈殿法との性能比較実験

K562(ヒト慢性骨髄性白血病)細胞培養上清(無血清培地または10%Exosome-depleted FBS添加培地)から本キット、超遠心分離法およびポリマー沈殿法を用いてエクソソームを回収し、回収量および純度を比較した。


MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS
遠心分離(10,000×g, 30分間)前処理したK562細胞培養上清(無血清培地または10%Exosome-depleted FBS添加培地)1mLからキットプロトコール(反応時間:3時間)に従ってエクソソームを回収した。


超遠心分離法
遠心分離(10,000×g, 30分間)前処理したK562細胞培養上清サンプル(無血清培地または10%Exosome-depleted FBS添加培地)10mLから超遠心分離(110,000×g, 70分間)し、沈殿をTBSで懸濁後、再び超遠心分離(110,000×g, 70分間)した沈殿画分を回収した。


ポリマー沈殿法
遠心分離(10,000×g, 30分間)前処理したK562細胞培養上清(無血清培地または10%Exosome-depleted FBS添加培地)1mLから市販のA社製品を用いて製品プロトコール(静置時間:終夜)に従いエクソソームを回収した。

取得エクソソームの電子顕微鏡解析およびNTA(ナノサイト)比較

K562細胞培養上清サンプル(無血清培地)から本キット、超遠心分離法、ポリマー沈殿法によって回収したエクソソーム画分の粒子径をナノサイトLM-10を用いて測定した。また、回収したエクソソーム画分(2〜4×1010particles)を終濃度2%パラホルムアルデヒドで固定化し、電子顕微鏡にて解析した。

取得エクソソームの電子顕微鏡解析およびNTA(ナノサイト)比較

電子顕微鏡画像 データ提供元:金沢大学 医学系 華山教授、大阪大学 iFReC 中井先生

K562細胞培養上清(無血清培地)からの回収量と純度の比較

K562細胞培養上清(無血清培地)から本キット、超遠心分離法、ポリマー沈殿法で回収したサンプルを電気泳動した後、銀染色およびウェスタンブロット(抗CD63抗体、抗Lamp-1抗体、抗Flotillin-2抗体)により検出を行った。

K562細胞培養上清(無血清培地)からの回収量と純度の比較

K562細胞培養上清(10%FBS添加培地)からの回収量と純度の比較

K562細胞培養上清(10%Exosome-depleted FBS添加培地)から本キット、超遠心分離法、ポリマー沈殿法で回収したサンプルを電気泳動した後、銀染色およびウェスタンブロット(抗CD63抗体、抗Lamp-1抗体、抗Flotillin-2抗体)により検出を行った。また、各回収画分をMASS解析し、同定した全ペプチドのうちK562細胞に由来するヒトペプチドの割合を比較した(培地に添加したFBSに由来するウシタンパク質凝集体が混入するほどヒト由来ペプチドの割合は低下する)。

K562細胞培養上清(10%FBS添加培地)からの回収量と純度の比較

MASS解析 データ提供元:金沢大学 医学系 華山教授、大阪大学 iFReC 中井先生

健常ヒト血清由来エクソソームからのmiRNAおよびmRNAの回収量比較

実験データ

①各手法にて調製したエクソソームからのmicroRNAおよびmRNAの回収量比較
超遠心分離法とPSアフィニティー法によって健常ヒト血清サンプルからエクソソームを単離した後、microRNA Extractor® SP Kit (コードNo. 295-71701 )を用いてRNAを回収し、定量PCR法によりmicroRNA量(let-7a, muR-16, miR-92a, miR-142-3p)およびmRNA量(GAPDH, PIK3CB)をCt値で比較した。

実験データ

超遠心分離法よりPSアフィニティー法で回収したエクソソームから効率良くmicroRNAおよびmRNAを回収できた。



②PSアフィニティー画分からのRNA抽出法の比較
PSアフィニティー法によって健常ヒト血清サンプルからエクソソームを単離した後、microRNA Extractor SP® Kit (コードNo. 295-71701)、またはAGPC法によってRNAを回収し、定量PCR法によりmicroRNA量(let-7a, muR-16, miR-92a, miR-142-3p)およびmRNA量(GAPDH, PIK3CB)をCt値で比較した。

実験データ

AGPC法よりmicroRNA Extractor SP Kitを用いることでエクソソームから効率良くmicroRNAおよびmRNAを回収できた。



関連製品:microRNA Extractor® SP Kit

ヒトや動物の血清・血漿からmicroRNAを含むTotal RNAを抽出するキットです。従来の抽出法で必要だったフェノール、クロロホルムなどの劇物を使用せずmicroRNAを高い収率で抽出できます。

コードNo. 品 名 容 量 希望納入価格(円)
295-71701 refrigerator 危険物 microRNA Extraxtor® SP Kit 50回用 57,000

細胞培養上清・血清・血漿 前処理プロトコール

細胞培養上清・血清 前処理プロトコール

※1 Exosome+Large Evsを取得したい場合、1,200×g上清を精製に使用して下さい。
※2 Exosomeを取得したい場合、10,000×g上清を精製に使用して下さい。

※3 濃縮ステップは大容量(〜50mL)の細胞培養上清から精製する場合のオプションですが、回収効率が向上するため、可能な限り実施して下さい。

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS 操作フロー

操作フロー

参考文献

W. Nakai, T. Yoshida, D. Diez, Y. Miyatake, T. Nishibu, N. Imawaka, K. Naruse, Y. Sadamura & R. Hanayama, Sci Rep 6, 33935 (2016).

関連製品

Tim-Fcシリーズ

本シリーズは、ヒトまたはマウスのTIMファミリー(TIMD1 or TIMD3 or TIMD4)の細胞外ドメインがヒトIgG1またはマウスIgG2aのFcドメイン(ヒンジ配列含む)のN末端側に融合した組換えタンパク質です。
TIMD(T cell immunoglobulin and mucin domain)ファミリーは、アレルギー、喘息、移植トレランス、自己免疫、およびウイルス感染への反応を含む免疫応答制御において重要な役割を担っていると考えられています。また、TIM免疫グロブリン可変領域の特徴的な構造により、TIMDファミリーは、アポトーシス細胞の表面に露出したホスファチジルセリンと特異性高く結合することも報告されています。

コードNo. 品 名 容 量 希望納入価格(円)
080-10231 freeze ヒトTIM1/ヒトFcキメラ, 組換え体 100µg 70,000
087-10241 freeze ヒトTIM3/ヒトFcキメラ, 組換え体 100µg 70,000
084-10251 freeze ヒトTIM3/マウスFcキメラ, 組換え体 100µg 70,000
081-10261 freeze ヒトTIM4/ヒトFcキメラ, 組換え体 100µg 70,000
137-18491 freeze マウスTIM1/ヒトFcキメラ, 組換え体 100µg 75,000
130-18501 freeze マウスTIM3/ヒトFcキメラ, 組換え体 100µg 75,000
137-18511 freeze マウスTIM4/ヒトFcキメラ, 組換え体 100µg 75,000

コントロールタンパク質(ヒトIgG1Fc、マウスIgG2aFc)

本品は、ヒトIgG1FcドメインまたはマウスIgG2aドメイン(ヒンジ配列含む)のみの組換えタンパク質です。ヒトIgGFcドメインを融合させた目的キメラタンパク質の活性測定やウェスタンブロッティングなどの実験系で、コントロールとしてご使用ください。凍結乾燥品です。
Fc(non-lytic)タイプは、補体(C1q)結合領域、FcgR1結合領域に変異が入っているので、抗体依存性細胞障害(antibody directed cytotoxicity, ADCC)および補体依存性細胞障害(complement directed cytotoxicity, CDC)が起きません。

コードNo. 品 名 容 量 価格(円)
098-07141 freeze IgG1 Fc, ヒト, 組換え体 100µg 58,000
095-07151 freeze IgG1 Fc(non-lytic), ヒト, 組換え体 100µg 58,000
092-07161 freeze IgG2a Fc, マウス, 組換え体 100µg 58,000
099-07171 freeze IgG2a Fc(non-lytic), マウス, 組換え体 100µg 58,000

MagCaptureシリーズ用 磁気ビーズ捕集用マグネットスタンド

マグネットスタンド

本品は、磁気ビーズ捕集用のマグネットスタンドです。MagCaptureシリーズに代表される細胞培養上清、血清、尿等の検体に含まれる特定成分の精製を行う磁気ビーズ法にてご使用いただけます。 1.5ml(2.0ml)のマイクロチューブ16本を一括で操作が可能で、また強力な磁石を配置したことで、微小の磁気ビーズの捕集も短時間に行えるため、待ち時間のストレスを感じさせません。

コードNo. 品 名 容 量 価格(円)
290-35591 マグネットスタンド 1個 60,000

refrigerator・・・2〜10℃保存   freeze・・・-20℃保存   -80 degree C・・・-80℃保存   表示がない場合は室温保存です。
特定毒物・・・特定毒物   毒物1 毒物2・・・毒物   劇物1 劇物2 劇物3・・・劇物   毒薬・・・毒薬   劇薬・・・劇薬   危険物・・・危険物   向精神薬・・・向精神薬
特定麻薬向精神薬原料・・・特定麻薬向精神薬原料   化審法 第一種特定化学物質・・・化審法 第一種特定化学物質   化審法 第二種特定化学物質・・・化審法 第二種特定化学物質
化学兵器禁止法 第一種指定物質・・・化学兵器禁止法 第一種指定物質   化学兵器禁止法 第二種指定物質・・・化学兵器禁止法 第二種指定物質
カルタヘナ・・・カルタヘナ   覚せい剤取締法・・・覚せい剤取締法   国民保護法・・・国民保護法

*上記以外の法律および最新情報は、siyaku.com(http://www.siyaku.com/)をご参照下さい。

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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和光純薬工業株式会社

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