和光純薬工業株式会社試薬 [Laboratory Chemicals] 試験研究用試薬・抗体の製造販売および各種受託サービス
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JOHN INNES ENTERPRISES LTD.社
大腸菌由来 DNA gyrase & Topoisomerase IV

イメージ 英国のJIE社のDNAトポイソメラーゼ関連試薬の取り扱いを開始致しました。JIE社は、DNAトポロジーの分野で権威のあるJohn Innes Centre(英国)のA.Maxwell教授と技術提携しており、実績と信頼のある製品をご提供しています。新製品の大腸菌由来DNA Topoisomerase IVを含め、大腸菌由来DNAジャイレースおよび3種類のアッセイキット、抗DNAジャイレース抗体もラインナップしております。また、in-houseでのDrug Screeningサービスも行っております。






製品群

DNA Gyrase from Escherichia coli


本品は、分子量40万のA2B2サブユニットからなる4量体で、ATPの加水分解にともない正の超らせんDNAあるいは、緩和DNAを負の超らせんに変換することができる酵素活性を持っています。また、ATPの存在下では、逆に負の超らせんを緩和することができます。本品は、大腸菌のJMtacA株とJMtacB株を過剰発現させ、A2B2複合体として供給されます。



内容

  • ・DNA Gyrase(5units/μL)  200μL×1本
  • ・Gyrase Dilution Buffer   1mL×1本
  • ・5×Gyrase Assay Buffer  1mL×1本

Gyrase
(Dilution Buffer)
50mmol/L Tris-HCl(pH7.5), 100mmol/L KCl, 2mmol/L DTT, 1mmol/L EDTA, 50%(v/v) glycerol
5×Assay Buffer
175mmol/L Tris-HCl(pH7.5), 120mmol/L KCl, 20mmol/L MgCl2, 10mmol/L DTT, 9mmol/L spermidine, 5mmol/L ATP, 33%(v/v)glycerol, 0.5mg/mL albumin
ユニットの定義
1unitは、30μLのIncubation Buffer中で、37℃、30分間に500ngのrelaxedpBR322 DNAをtopoisomerに緩和する酵素活性です。
Endonuclease
活性
0.5μgのrelaxed pBR322 DNAを1mmol/L ATP存在下で、0.5unitのDNA Gyraseと37℃、1時間反応させた後、Superhelical DNAからopen circular およびlinear 形状にならないことをアガロース電気泳動で確認しています。
品質保証
AサブユニットとBサブユニットがSDS-PAGEで95%以上であることを確認しています。
備 考
希釈バッファーで5units/μLに調製されています。
参考文献
Hallett, P., Grimshaw, A.J., Wigley, D.B. and Maxwell, A.:Cloning of the DNA gyrase genes under tac promoter contol:overproduction of the gyrase A and B proteins, Gene, 93, 139(1990)

DNA Gyrase Supercoiling Kit


キット内容

 
Decatenation反応
Kit 1
Kit 2
Kit 3
Kit 4
DNA Gyrase(5units/μL)
100units
500units
1,000units
2,000units
Relaxed pBR322(1μg/μL)
50μg
250μg
500μg
1mg
5×Assay Buffer
1mL×1本
1mL×1本
1mL×2本
1mL×3本
Dilution Buffer
1mL×1本
1mL×1本
1mL×2本
1mL×3本

組 成
5×Assay Buffer:35mmol/L Tris-HCl(pH7.5), 24mmol/L KCl, 2mmol/L MgCl2, 2mmol/L DTT, 1.8mmol/L spermidine, 1mmol/L ATP, 100μg/ml albumin, 6.5%(v/v) glycerol
Dilution Buffer
50mmol/L Tris-HCl(pH7.5), 100mmol/L KCl, 2mmol/L DTT, 1mmol/L EDTA, 50%(v/v) glycerol
Relaxed pBR32
1μg/μL(10mmol/L Tris-HCl,pH8.0, 1mmol/L EDTA)

Topoisomerase IV from Escherichia coli


Topoisomerase IVは、大腸菌のparCとparE遺伝子によってコードされた細菌由来のIV型トポイソメラーゼで、kDNAをdecatenateする強い活性とsupercoiled DNAを緩和する活性をもっています。TopoisomerazeIVは、quinolone系の抗菌性物質の標的であるため、抗感染薬剤の開発やスクリーニングアッセイに用いられています。本品は、大腸菌内でparCとparEサブユニットを過剰発現することで調製しています。製品は、ヘテロテトラマー複合体として供給されています。

内容

  • ・Topoisomerase IV(10units/μL) 10μL×1本
  • ・Topo IV Dilution Buffer 1mL ×1本
  • ・Topo IV 5×Assay Buffer  1mL ×1本

TopoIV
1unitは、1×Assay Bufferを用いた30μLの反応系で37℃、30分間に200ngのkDNAをdecatenateする酵素活性を表します。
ユニットの定義
40mmol/L Hepes-KOH(pH7.6), 150mmol/L Potassium Glutamate, 1mmol/L DTT, 1mmol/L EDTA, 40%(v/v) glycerols
5×Assay Buffer
200mmol/L Hepes-KOH(pH7.6), 500mmol/L Potassium Glutamate, 50mmol/L Magnesium Acetate, 50mmol/L DTT, 20μg/mL tRNA, 10mmol/L ATP, 250μg/mL albumin
品質保証
parCとparEサブユニットがSDS-PAGEで95%以上であることを確認しています。
注意事項
繰り返しの凍結融解を防ぐため、小分け分注をお奨めします。
備   考
  •  ・本品には、Decatenationアッセイ以外に、Relaxingアッセイ用の使用説明書が添付されています。
      両アッセイを行う場合は、基質DNA(kDNAおよびSupercoiled pBR322)を、別途購入するか、
      キットを購入する必要があります。
  •  ・希釈バッファーで10units/μLに調製されています。
参考文献
Peng, H. and Marians, K.J.: Overexpression and purification of bacterial topoisomerase IV, in DNA Topoisomerase Protocols Vol.1
(Bjornsti, M-A., and Osheroff, N. ends.), Humana Press, Totowa, N Jersey,163(1999)

Topoisomerase IV Relaxing Kit


Topoisomerase IVを用いたRelaxing反応を行うキットです。反応に必要な試薬および基質がセットになっています。

キット内容

 
Relaxing反応
Kit 1
Kit 2
Kit 3
Kit 4
Topoisomerase IV(10units/μL)
100units
500units
1,000units
2,000units
Supercoiled pBR322 (1μg/μL)
40μg
200μg
200μg
200μg
5×Assay Buffer
1mL×1本
1mL×1本
1mL×2本
1mL×3本
Dilution Buffer
1mL×1本
1mL×1本
1mL×2本
1mL×3本

Dilution Buffer
40mmol/L Hepes-KOH(pH7.6), 150mmol/L Potassium Glutamate, 1mmol/L DTT, 1mmol/L EDTA, 40%(v/v) glycerol
5×Assay Buffer
200mmol/L Hepes-KOH(pH7.6), 500mmol/L Potassium Glutamate, 50mmol/L Magnesium Acetate, 50mmol/L DTT, 20μg/mL tRNA, 10mmol/L ATP, 250μg/mL albumin
Supercoiled pBR322
1μg/uL (10mmol/L Tris-HCl,pH8.0, 1mmol/LEDTA)


Topoisomerase IV Decatenation Kit


Topoisomerase IVを用いたDecatenation反応を行うキットです。反応に必要な試薬および基質がセットになっています。

キット内容

Decatenation反応
Kit 1
Kit 2
Kit 3
Kit 4
Topoisomerase IV(10units/μL)
100units
500units
1,000units
2,000units
kDNA(100ng/μL)
20μg
100μg
200μg
400μg
5×Assay Buffer
1mL×1本
1mL×1本
1mL×2本
1mL×3本
Dilution Buffer
1mL×1本
1mL×1本
1mL×2本
1mL×3本

Dilution Buffer
40mmol/L Hepes-KOH(pH7.6), 150mmol/L Potassium Glutamate, 1mmol/L DTT, 1mmol/L EDTA, 40%(v/v), glycerol
5×Assay Buffer
200mmol/L Hepes-KOH(pH7.6), 500mmol/L Potassium Glutamate, 50mmol/L Magnesium Acetate, 50mmol/L DTT, 20μg/mL tRNA, 10mmol/L ATP,250μg/mL albumin
kDNA
100ng/uL (10mmol/L Tris-HCl,pH8.0, 1mmol/L EDTA)
kDNAの由来
Crithidia fasciculata

モノクローナル抗体,ポリクローナル抗体

GyrA、GyrBに対するポリクローナル抗体および、GyrAおよびGyrBのN末、C末をそれぞれ認識するモノクローナル抗体をご用意しています。
ウエスタンブロッティングに使用することができます。

製品説明書


モノクローナル抗体の認識部位およびサブクラス

抗体名
認識部位
subclass
Anti-GyrA(7F11)
Gyr AのN末端
IgG2b
Anti-GyrA(4D3)
Gyr AのC末端
IgG2b
Anti-GyrB(7D3)
Gyr BのN末端
IgG2a
Anti-GyrB(9G8)
Gyr BのC末端
IgG2a

精製方法
ウサギ血液により単離(ポリクローナル抗体) 。低塩法によるProtein Aカラムにより精製(モノクローナル抗体)
希釈倍率
1:200〜1:1,000(ウエスタンブロッティング)
保存溶液
PBS(pH7.2)
備 考
希釈する場合は、PBSをお奨めします。
品質保証
SDS-PAGEで95%以上であることを確認しています。
Endonuclease
活性
0.5μgのSupercoiled pBR322 DNAを1mmol/L ATP存在下で、0.01μg/mL〜100μg/mLの濃度範囲の抗体と、37℃、1時間反応させた後、Superhelical DNAからopen circular およびlinear形状にならないことをアガロース電気泳動で確認しています。
Exonucelase
活性
1μgのlinear pBR322 DNAを0.01μg/mL〜10μg/mLの濃度範囲の抗体と、37℃、30分間反応させた後、competent JM109を形質転換させても形質転換効率の減少を認めないことを確認しています。
参 考 文 献
Ey, P. L., Prowse,S. J. &Jenkin, C.R.:Isolation of pure IgG1, IgG2a, and IgG2b immunoglobulins from mouse serum using Protein A sepharose.,Immunochemistry, 15, 429(1978)

Drug Screeningサービス

gel-based アッセイ、ATPaseおよびSPRによるIC50決定するためのDrug screeningサービスを行っています。
経験のある研究者によるin-houseアッセイです。ご興味のある方はご連絡下さい。


価格表

DNA Gyrase関連製品

Code No.
品 名
メーカーコード
容量
希望納入価格はこちら
554-71841
DNA Gyrase(5units/μL) 
EC 5.99.1.3
G1001
100 units
550-71843
G5002
500 units
照 会
558-71844
G1003
1,000 units
照 会
554-71846
G2004
2,000 units
照 会
551-71851
Relaxed pBR322 (1μg/μL)
R5001
50μg
557-71853
R2502
250μg
照 会
555-71854
R5003
500μg
照 会
551-71856
R1004
1mg
照 会
558-71861
5×Assay Buffer, 1mL
B0001
1本
555-71871
DNA Gyrase Dilution Buffer
B0002
1mL
559-71891
DNA Gyrase Supercoiling Kit 1
K0001
1 Kit
552-71901
DNA Gyrase Supercoiling Kit 2
K0002
1 Kit
照 会
559-71911
DNA Gyrase Supercoiling Kit 3
K0003
1 Kit
照 会
556-71921
DNA Gyrase Supercoiling Kit 4
K0004
1 Kit
照 会

Topoisomerase IV関連製品

Code No.
品 名
メーカーコード
容量
希望納入価格はこちら
555-71991
Topoisomerase IV(10units/μL)
EC 5.99.1.3
T4001
100units
551-71993
T4002
500units
照 会
559-71994
T4003
1,000units
照 会
555-71996
T4004
2,000units
照 会
558-72101
Topo IV Dilution Buffer, 1mL
TD002
1本
照 会
558-72081
kDNA(100ng/μL)
K2001
20μg
554-72083
K1002
100μg
552-72084
K2003
200μg
照 会
558-72086
K4004
400μg
照 会
555-72111
5×Topo IV Decatenatin Buffer, 1mL
TD003
1本
照 会
552-71881
Supercoiled pBR322 (1μg/μL)
S5001
50μg
558-71883
S2502
250μg
照 会
556-71884
S5003
500μg
照 会
552-71886
S1004
1mg
照 会
555-72091
5×Topo IV Relaxing Buffer, 1mL
TR001
1本
552-72001
Topoisomerase IV Relaxation Kit 1
R4001
1 Kit
559-72011
Topoisomerase IV Relaxation Kit 2
R4002
1 Kit
照 会
556-72021
Topoisomerase IV Relaxation Kit 3
R4003
1 Kit
照 会
553-72031
Topoisomerase IV Relaxation Kit 4
R4004
1 Kit
照 会
550-72041
Topoisomerase IV Decatenation Kit 1
D4001
1 Kit
照 会
557-72051
Topoisomerase IV Decatenation Kit 2
D4002
1 Kit
照 会
554-72061
Topoisomerase IV Decatenation Kit 3
D4003
1 Kit
照 会
551-72071
Topoisomerase IV Decatenation Kit 4
D4004
1 Kit
照 会

抗体関連製品

Code No.
品 名
メーカーコード
容量
希望納入価格はこちら
551-71971
anti-Gyr A, rabbit
PA001
0.1mL*
照 会
558-71981
anti-Gyr A, rabbit
PB001
0.1mL*
照 会
553-71931
anti-Gyr A, rabbit
7F001
0.1mL*
照 会
559-71933
7F005
0.5mL*
照 会
557-71934
7F100
2mL*
照 会
550-71941
anti-Gyr A, rabbit
4D001
0.1mL*
照 会
556-71943
4D005
0.5mL*
照 会
554-71944
4D100
2mL*
照 会
554-71961
anti-Gyr A, rabbit
7D001
0.1mL*
照 会
550-71963
7D005
0.5mL*
照 会
558-71964
7D100
2mL*
照 会
557-71951
anti-Gyr A, rabbit
9G001
0.1mL*
照 会
553-71953
9G005
0.5mL*
照 会
551-71954
9G100
2mL*
照 会

 

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格はリンク先のSiyaku.comでご確認ください。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。


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和光純薬工業株式会社

本社〒540-8605大阪市中央区道修町三丁目1番2号       TEL 06-6203-3741(代表)
東京本店〒103-0023東京都中央区日本橋本町二丁目4番1号 TEL 03-3270-8571(代表)
●九州営業所 092-622-1005(代) ●中国営業所 082-285-6381(代) ●東海営業所 052-772-0788(代)
●藤沢営業所 0466-29-0351(代) ●筑波営業所 0298-58-2278(代) ●東北営業所 022-222-3072(代)
●北海道営業所 011-271-0285(代)
E-mail: labchem-tec@wako-chem.co.jp URL: http://www.wako-chem.co.jp
フリーダイヤル: 0120-052-099 フリーファックス: 0120-052-806