和光純薬工業株式会社試薬 [Laboratory Chemicals] 試験研究用試薬・抗体の製造販売および各種受託サービス
製品カタログ 試験研究用試薬・抗体 請求
試薬ホーム  >  製品情報  >  ライフサイエンス  >  遺伝子  >  LH遺伝子変異検出キット

簡便・迅速・正確・安価に遺伝子変異を検出!!
遺伝子変異検出キットシリーズ

LH Gene Mutation Detection Kit series

遺伝子変異検出キット 対象遺伝子(BRAF、EGFR、KRAS)における点変異、挿入変異、欠損変異を簡便、迅速、正確、安価に検出できます。
Loop Hybrid Mobility Shift Assay(LH-MSA法)を基本原理とし、変異遺伝子領域にハイブリダイズするLoop Hybrid Probe(LH Probe)の二次構造変化をポリアクリルアミドゲル電気泳動で検出します。
LH-MSA法は、高価なリアルタイムPCR装置及び特異的プローブなどの特別な設備・機器を必要としません。


リンク関係


特長

  • リアルタイムPCR法に比べて非常に安価!!
  • 特殊な設備・機器が不要!!
  • 操作が簡便、作業時間・手間が低減!!
  • 1プローブで稀な変異も検出可能!!
  • 非常に高感度!!

操作概要/検出原理

操作概要

操作概要

検出原理

検出原理

ラインアップ

本キットは、研究用試薬です。試験、研究の目的のみに使用されるもので、「体外診断用医薬品」、「食品」、「生活用品」などとして使用できません。

コードNo. 品 名 容 量 希望納入価格(円)
299-76101 freeze LH遺伝子変異検出キット(BRAF V600E用) 1キット(16サンプル×6回用) 65,000
291-76301 freeze LH遺伝子変異検出キット(EGFR Exon19 Deletion用) 1キット(16サンプル×6回用) 65,000
293-76501 freeze LH遺伝子変異検出キット(EGFR Exon20 Insertion用) 1キット(16サンプル×6回用) 65,000
295-76701 freeze LH遺伝子変異検出キット(EGFR Exon21 L858R用) 1キット(16サンプル×6回用) 65,000
297-76901 freeze LH遺伝子変異検出キット(KRAS Mutations at Codons 12 and 13用) 1キット(16サンプル×6回用) 65,000

*製品コードをクリックするとSiyaku.comにリンクしますので、現在の価格、在庫はそちらからご確認下さい。

実験例 - 電気泳動

ヒト大腸がん組織の凍結切片またはヒト肺がん組織ホルムアミド・パラフィン包埋切片より抽出したゲノムDNAとその他コントロールDNAを用いて、各対象遺伝子(BRAF、EGFR、KRAS) における遺伝子変異を検出しました。
本実験データは、神奈川県立がんセンター臨床研究所 がん分子病態学部 松隈章一先生より提供していただきました。


BRAF遺伝子の点変異検出実験

実験条件に示すサンプルとその他コントロールDNAを用いて、BRAF遺伝子コドン600における点変異を検出しました。

【結果】

  • BRAF V600E変異細胞株(COLO 205)と同じ位置に変異型サンプル(サンプル 4〜6)のバンドを高感度で検出!!
  • D594G(サンプル 7)という稀な変異も同じLH Probeで検出!!
BRAF遺伝子の点変異検出実験 WakoReport抗がん剤ゼルボラフは、BRAF遺伝子に変異のある患者に効果が高いことが臨床試験で明らかになっています。2011年8月、米国食品医薬品局(FDA)により、BRAF V600E遺伝子変異があり、切除不能または転移性メラノーマである場合の治療薬として承認されています。
大腸がんの約10%にBRAF遺伝子があり、BRAF遺伝子に変異がある大腸がん患者のゲノムDNAは高メチル化状態であることから、メチル化の蓄積と遺伝子変異の研究が数多く報告されています。
<実験条件>
・サンプル 1-7 : ヒト大腸がん組織凍結切片由来ゲノムDNA
・電気泳動ゲル : SuperSep™ Ace, 10%, 17well(推奨品)
〔定電流、20mA〕
・泳動時間 : 70分(目安)
・染色 : Gel Red™ 核酸ゲル染色液(x10000)水溶液 
 BRAF遺伝子 PCR増幅産物 : 157 bp

EGFR遺伝子のExon19欠損変異検出実験

実験条件に示すサンプルとその他コントロールDNAを用いて、EGFR遺伝子Exon19のコドン746から750における欠損変異を検出しました。

【結果】

  • 最も品質が悪いとされるFFPE切片*1から抽出したゲノムDNAでも変異型サンプルのバンドシフトを高感度で検出!!
  • 挿入変異(サンプル 8)という稀な変異も同じLH Probeで検出!!

*1 FFPE : ホルマリン固定・パラフィン包埋

EGFR遺伝子のExon19欠損変異検出実験 WakoReportゲフィチニブは上皮成長因子受容体(Epidermal Growth Factor Receptor;EGFR)の チロシンキナーゼの働きを阻害する作用を持ち、非小細胞肺癌(NSCLC)に対する分子標的治療薬として2002年7月に世界に先駆けて日本で承認されました。しかし本薬剤による間質性肺炎の発生が副作用として大きな問題となっています。ゲフィチニブにおいては、EGFRのチロシンキナーゼ活性部位に遺伝子変異があれば効果があることが確認されており、その検査が重要となっています。
NSCLCの20〜25%のEGFR遺伝子Exon19コドン746-750を中心とする部位に欠損変異があると報告されています。
<実験条件>
・サンプル 1-8 : ヒト肺がん組織ホルムアミド・パラフィン包埋切片由来ゲノムDNA
・電気泳動ゲル : SuperSep™ Ace, 10%, 17well(推奨品)
〔定電流、20mA〕
・泳動時間 : 70分(目安)
・染色 : Gel Red™ 核酸ゲル染色液(x10000)水溶液
 EGFR遺伝子Exon19 PCR増幅産物 : 146 bp

EGFR遺伝子のExon20挿入変異検出実験

実験条件に示すサンプルとその他コントロールDNAを用いて、EGFR遺伝子Exon20における挿入変異を検出しました。

【結果】

  • 最も品質が悪いとされるFFPE切片から抽出したゲノムDNAでも変異型サンプルのバンドシフトを高感度で検出!!
EGFR遺伝子のExon20挿入変異検出実験 WakoReportゲフィチニブは上皮成長因子受容体(Epidermal Growth Factor Receptor;EGFR)のチロシンキナーゼの働きを阻害する作用を持ち、非小細胞肺癌(NSCLC)に対する分子標的治療薬として2002年7月に世界に先駆けて日本で承認されました。しかし本薬剤による間質性肺炎の発生が副作用として大きな問題となっています。ゲフィチニブにおいては、EGFRのチロシンキナーゼ活性部位に遺伝子変異があれば効果があることが確認されており、その検査が重要となっています。
NSCLCの約5%のEGFR遺伝子Exon20に挿入変異があると報告されています。
<実験条件>
・サンプル 1-7 : ヒト肺がん組織ホルムアミド・パラフィン包埋切片由来ゲノムDNA
・電気泳動ゲル : SuperSep™ Ace, 10%, 17well(推奨品)
〔定電流、20mA〕
・泳動時間 : 70分(目安)
・染色 : Gel Red™ 核酸ゲル染色液(x10000)水溶液
 EGFR遺伝子Exon20 PCR増幅産物: 189 bp

EGFR遺伝子のExon21点変異検出実験

実験条件に示すサンプルとその他コントロールDNAを用いて、EGFR遺伝子Exon21のL858R点変異を検出しました。

【結果】

  • 最も品質が悪いとされるFFPE切片から抽出したゲノムDNAでも変異型サンプルのバンドシフトを高感度で検出!!
EGFR遺伝子のExon21点変異検出実験 WakoReportゲフィチニブは上皮成長因子受容体(Epidermal Growth Factor Receptor;EGFR)のチロシンキナーゼの働きを阻害する作用を持ち、非小細胞肺癌(NSCLC)に対する分子標的治療薬として2002年7月に世界に先駆けて日本で承認されました。しかし本薬剤による間質性肺炎の発生が副作用として大きな問題となっています。ゲフィチニブにおいては、EGFRのチロシンキナーゼ活性部位に遺伝子変異があれば効果があることが確認されており、その検査が重要となっています。
NSCLCの20〜25%のEGFR遺伝子Exon21コドン858においてロイシンからアルギニンへの点変異があると報告されています。
<実験条件>
・サンプル 1-4 : ヒト肺がん組織ホルムアミド・パラフィン包埋切片由来ゲノムDNA
・電気泳動ゲル : SuperSep™ Ace, 10%, 17well(推奨品)
〔定電流、20mA〕
・泳動時間 : 70分(目安)
・染色 : Gel Red™ 核酸ゲル染色液(x10000)水溶液
 EGFR遺伝子Exon21 PCR増幅産物: 184 bp

KRAS遺伝子の点変異検出実験

実験条件に示すサンプルとその他コントロールDNAを用いて、KRAS遺伝子のコドン12および13のグリシンにおける点変異を検出しました。

【結果】

  • 変異型サンプル(サンプル 2-7)のバンドシフトを高感度で検出!!
  • G12D以外の変異も同じLH Probeで検出!!
KRAS遺伝子の点変異検出実験 WakoReport抗がん剤セツキシマブは、KRAS遺伝子に変異のない野生型患者に効果が高いことが臨床試験で明らかになっており、厚生労働省は2010年3月23日付に発出した通知で、KRAS 遺伝子変異の有無を考慮して投与することを追記するよう指導しました。
大腸がん患者の約30%にKRAS遺伝子変異があり、KRAS遺伝子に変異がある大腸がん患者のゲノムDNAは中メチル化状態であることから、メチル化の蓄積と遺伝子変異の研究が数多く報告されています。
<実験条件>
・サンプル 1-7 : ヒト大腸がん組織凍結切片由来ゲノムDNA
・電気泳動ゲル : SuperSep™ Ace, 10%, 17well(推奨品)
〔定電流、20mA〕
・泳動時間 : 70分(目安)
・染色 : Gel Red™ 核酸ゲル染色液(x10000)水溶液
 KRAS遺伝子 PCR増幅産物 : 165 bp

キット構成 (96サンプル用: 16サンプル×6回用)

1. 10×Buffer・・・・・・102μL×1本
2. dNTPs・・・・・・・・102μL×1本
3. DNA Polymerase・・・12μL×1本
4. Forward Primer*1・・・51μL×1本
5. Reverse Primer*1・・・・・180μL×1本
6. LH Probe・・・・・・・・・・96μL×1本
7. Wild Type Control DNA・・・6μL×1本
8. 各Control DNA*2・・・・・・6μL×1本
9. Loading Buffer*3・・・288μL×1本
10. DNA Marker・・・・・9μL×1本
*1 Exon21 L858R用は、Forward Primer 180μL、Reverse Primer 51μL
*2 BRAF V600E : V600E コントロール DNA、EGFR Exon19 : 欠損型コントロール DNA、EGFR Exon20 : 挿入型コントロール DNA
  EGFR Exon21: L858R コントロール DNA、KRAS Mutations : G12D コントロール DNA
*3 内容は6X濃度です。また、青色とオレンジ色の色素が入っています。

関連製品

コードNo. 品 名 容 量 希望納入価格(円)
192-14961 refrigerator SuperSep™Ace, 10%, 17well 10枚 14,000
196-14981 refrigerator SuperSep™Ace, 12.5%, 17well 10枚 14,000
519-20301 GelRed™ Nucleic Acid Gel Stain, 10,000x in Water 0.5mL 23,200
517-53333 GelGreen™ Nucleic Acid Gel Stain, 10,000x in Water 0.5mL 28,000
201-18601 refrigerator 10×Tris-Glycine Buffer 1L 7,200
316-90101 Distilled Water, Deionized, Sterile 100mL 4,000
058-07681 EasySeparator 1セット 52,000
295-52401 refrigeratorDNA Isolator PS Kit 100テスト 25,000
303-89321 reian-syoEtBr Destroyer Bag 20個 25,400
300-89331 reian-syoEtBr Destroyer Sprayer 200mL×2 13,000

*製品コードをクリックするとSiyaku.comにリンクしますので、現在の価格、在庫はそちらからご確認下さい。

refrigerator・・・2〜10℃保存   freeze・・・-20℃保存   -80 degree C・・・-80℃保存   表示がない場合は室温保存です。
tokuteidoku・・・特定毒物   doku1 doku2・・・毒物   geki1 geki2 geki3・・・劇物   kashin1・・・化審法 第一種特定化学物質   kashin2・・・化審法 第二種特定化学物質
dokuyaku・・・毒薬   gekiyaku・・・劇薬   kahei1・・・化学兵器禁止法 第一種指定物質   kahei2・・・化学兵器禁止法 第二種指定物質
kouseishinnyaku・・・向精神薬   tokumagenn・・・特定麻薬向精神薬原料   cartagena・・・カルタヘナ

*掲載内容は、2015年5月時点での情報です。上記以外の法律および最新情報は、siyaku.com(http://www.siyaku.com/)をご参照下さい。

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

試薬ホーム  >  製品情報  >  ライフサイエンス  >  遺伝子  >  LH遺伝子変異検出キット

和光純薬工業株式会社

本社〒540-8605大阪市中央区道修町三丁目1番2号       TEL 06-6203-3741(代表)
東京本店〒103-0023東京都中央区日本橋本町二丁目4番1号 TEL 03-3270-8571(代表)
●九州営業所 092-622-1005(代) ●中国営業所 082-285-6381(代) ●東海営業所 052-772-0788(代)
●藤沢営業所 0466-29-0351(代) ●筑波営業所 0298-58-2278(代) ●東北営業所 022-222-3072(代)
●北海道営業所 011-271-0285(代)
E-mail: labchem-tec@wako-chem.co.jp URL: http://www.wako-chem.co.jp
フリーダイヤル: 0120-052-099 フリーファックス: 0120-052-806