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ミトコンドリア内の鉄だけを光らせる
ミトコンドリア内鉄検出蛍光試薬

鉄は、生体内で最も多く存在する遷移金属元素であり、さまざまな生理活性を示すことが報告されています。近年、タンパク質非結合型の鉄イオン(自由鉄)としての存在が注目されており、その高い反応性は細胞損傷や細胞死にも関与していることが示唆されています。自由鉄は安定な化学種である鉄(II)イオンおよび鉄(III)イオンとして存在しますが、生細胞内において、細胞内還元的環境、水溶性、トランスポーターの存在等を考慮すると鉄(III)イオンよりも鉄(II)イオンの挙動を知ることが重要であると考えられています。

Mito-FerroGreen は、FeSクラスターやヘム合成の場として知られるミトコンドリア内の鉄(II)イオンと選択的に反応し強い蛍光(λex=505nm, λem=535nm)を発する試薬であり、ミトコンドリア内鉄(II)イオンのライブセルイメージングに利用することが可能です。

本製品は、岐阜薬科大学薬化学研究室 永澤秀子先生、平山祐先生のご指導の下、製品化しております。

測定原理

ミトコンドリア内鉄検出蛍光試薬


リンク

データ

確かなミトコンドリア集積性

Mito-FerroGreenのミトコンドリア内局在を確認するため、ミトコンドリア染色試薬(MitoBright Deep Red)と共染色を行い、Mito-FerroGreenがミトコンドリアを選択的に染色していることを確認した。

ミトコンドリア内鉄検出蛍光試薬 Mito-FerroGreen
励起波長:488nm
蛍光波長:500-565nm
 
MitoBright Deep Red
励起波長:640nm
蛍光波長:656-700nm

HeLa細胞に5μmol/L Mito-FerroGreenおよびミトコンドリア染色試薬 200nmol/L MitoBright Deep Red(コード:MT08)を添加し炭酸ガスインキュベータ内で30分間インキュベート。更に100μmol/L 硫酸アンモニウム鉄(U)を添加し、炭酸ガスインキュベータ内で1時間インキュベートし、蛍光イメージングにより観察。

 


 

ミトコンドリア内鉄のライブイメージング

血清を含むMEM増殖培地にて培養したHeLa細胞へMito-FerroGreenを添加することで、ミトコンドリアに内在する鉄を蛍光にて検出した(左図)。一方、鉄を添加したHeLa細胞では、Mito-FerroGreen の強い蛍光がみられ(中央図)、鉄キレート試薬と鉄を添加した細胞では、Mito-FerroGreen の蛍光はほどんど見られなかった。この様にミトコンドリア内鉄量の差を蛍光強度の差として確認した。

ミトコンドリア内鉄検出蛍光試薬 励起起波:488nm
蛍光波長:500-565nm

HeLa細胞に 5μmol/L Mito-FerroGreenを添加し、更に炭酸ガスインキュベータ内で30分間インキュベート(左図)。その後、鉄キレート試薬である10 mmol/L Deferoxamine (DFO) を添加(中央図)、または、10mmol/L DFOおよび100μmol/L 硫酸アンモニウム鉄(II)を添加し(右図)、それぞれを炭酸ガスインキュベータ内で1時間インキュベートしたものを蛍光イメージングにより観察。

 


 

Fe2+への高い選択性

ミトコンドリア内鉄検出蛍光試薬 Fe2+への高い選択性と高いシグナルが得られます。
 
50mmol/L HEPES Buffer(pH7.4)1mL中に1mmol/L Mito-FerroGreen 2μL、10mmol/L各種金属 2μLおよび 1mg/mL エステラーゼ 20μLを加え室温にて1時間反応後の蛍光強度を測定。
   
励起起波:500nm
蛍光波長:535nm

 

汎用フィルターに適応

ミトコンドリア内鉄検出蛍光試薬 極大励起波長が505nmにあるMito-FerroGreenは 488nmでの励起が可能です。
 
50mmol/L HEPES Buffer(pH7.4)3 mL中に1mmol/L Mito-FerroGreen 6μL、10mmol/L 硫酸アンモニウム鉄(U)6μLおよび 1mg/mL エステラーゼ 20μlを加え37℃にて1時間反応後の蛍光強度を測定。
 
励起起波:505nm
蛍光波長:535nm

 

製品一覧

コードNo. メーカーコード 品 名 容 量 希望納入価格(円)
344-09211 M489 ミトコンドリア内鉄検出蛍光試薬 50μg × 2 25,000

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*希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。
*収載されている試薬は、試験・研究の目的のみ使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などと しては使用できません。
*掲載内容は、2017年12月時点での情報です。上記以外の法律および最新情報は、siyaku.com(http://www.siyaku.com/)をご参照下さい。

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