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ヤマサ醤油 ラットS100A9アッセイキット

カルプロテクチン構成蛋白質である S100A9 は、腸内で炎症が生じた際に、マクロファージから早期に放出さることが報告されており、炎症性腸疾患のマーカーとして有用とされています1)

本製品は、ラット S100A9 を高感度に定量できる ELISA キットです。


リンク関係


はじめに

カルプロテクチンは S100A8 と S100A9 の 2 つの蛋白質の複合体であり、炎症性腸疾患のバイオマーカーとして知られています。ヤマサ醤油では、ラットカルプロテクチン 構成蛋白質である S100A9 に対するモノクローナル抗体を用いてラット S100A9 測定用 ELISA を開発しました。

本 ELISA を用いてデキストラン 硫酸ナトリウム(DSS)誘発潰瘍性大腸炎(UC)モデルラットの糞便中 S100A9 を測定した結果、炎症早期から S100A9 濃度が上昇し、UC モデルの良い指標となることが示唆されました1)

本 ELISA をキット化して製品としたのが、ラット S100A9 アッセイキットです。

特長

  • ラット S100A9 を 3.75〜240ng/mL の範囲で測定可能です。
  • 測定に必要な反応時間は一次反応 2 時間、二次反応 1 時間、発色反応 20 分です。
  • ラット血清および糞便中※1のS100A9測定が可能です。※2

※1:糞便中 S100A9 の測定には、抽出操作が必要です。詳しくは「測定上の注意」の(1)をご参照下さい。

※2:試料は希釈して測定して下さい。詳しくは「測定上の注意」の(2)をご参照下さい。

製品内容

●構成品
@ 抗体固相プレート 96穴マイクロプレート 1枚
A S100A9 標準液 1 (3.75ng/mL) 0.5mL 1バイアル
B S100A9 標準液 2 (15ng/mL) 0.5mL 1バイアル
C S100A9 標準液 3 (60ng/mL) 0.5mL 1バイアル
D S100A9 標準液 4 (240ng/mL) 0.5mL 1バイアル
E 希釈液(3 倍濃縮液) 25mL 1バイアル
F 洗浄原液(5 倍濃縮液) 50mL 1バイアル
G 酵素標識抗体 0.15mL 1バイアル
H 発色液 A 11mL 1バイアル
I 発色液 B 0.5mL 1バイアル
J 反応停止液 11mL 1バイアル

●貯蔵方法 2〜8度

●使用期限 製造日から18ヶ月

測定方法

【概要】

抗体固相プレートに標準液または検体を 100μL ずつ分注
↓  室温、2 時間静置
反応液を除去後、調製済み洗浄液 300μL を各ウェルに分注
↓  同操作を 3 回繰り返す
反応液を除去後、調製済み標識抗体 100μL を各ウェルに分注
↓  室温、1 時間静置
反応液を除去後、洗浄液 300μL を各ウェルに分注
↓  同操作を 3 回繰り返す
調製済み発色液 100μL を各ウェルに分注
↓  室温、20 分静置
反応停止液 100μL を各ウェルに分注

各ウェルの 450nm での吸光度を測定する

【標準曲線例】


【測定上の注意】

(1) ヤマサ醤油にて検討に用いたラット糞便からの抽出方法例は下記の通りです。ご参考の上、目的にあった抽出方法をご検討下さい。
 @抽出用希釈液の調製
 キット添付の希釈液を精製水にて3倍に希釈した溶液に最終濃度 0.5%(w/v)となるように Triton X-100 を加え、抽出用希釈液として使用します。
 A使用器具
 ペッスル、糞便回収用チューブ(ペッスルを差し込める口径の物)など
 B抽出方法
 1) 予め各糞便回収用チューブの重量を測定しておきます。
 2) 200mg 前後の便を糞便回収用チューブに回収します。
 3) 回収後重量を測定し、チューブの重量を差し引き、便の重量を算出します。
 4) 糞便回収用チューブに抽出用希釈液を 500μL 加えて、15 分静置します。
 5) ペッスルを使用し、便を粉砕して良く攪拌します。
 6) 抽出用希釈液 500μL でペッスルを洗いながら、全ての残物を回収します。
 7) 4℃、12,000×g で 5 分間遠心し、上清を別チューブに回収します。
 8) 上清を抽出用希釈液にて 10 倍以上に希釈します。
 9) 標準操作法により上清中の S100A9 濃度を求め、糞便 1mg 当たりの S100A9 を算出して下さい。
(2) 試料は添付の希釈液にて希釈してから測定して下さい。ラット血清および糞便抽出液共に10倍希釈が目安です。
  測定範囲以上の濃度を示す試料ついては、適宜希釈して下さい。

実験例

【S100A9は炎症性腸疾患のマーカーとして有用です】

デキストラン硫酸ナトリウム (DSS) 誘導潰瘍性大腸炎モデルラットの直腸組織では、S100A9 発現量が増加します(図1)。また、大腸組織中の S100A9 量は、コントロールに比べ有意に高値となります(図2)。

【糞便中S100A9は炎症性腸疾患の判定に有用です】

DSS 誘導潰瘍性大腸炎モデルラットの糞便中 S100A9 量は、 炎症早期から上昇します。Disease Activity Index Score (DAIスコア) に対し、客観的数値にて炎症を判定できます(図3)。

参考文献

1) 村山 寛 他:第42回日本毒性学会
2) Sekiya S et al. (2016). J Immunol Methods. 439. 44-49

価格表

コードNo. メーカーコード 品 名 容 量 希望納入価格(円)
633-41511 80126 ラットS100A9アッセイキット 96テスト 143,000

 

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。


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