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生体試料の深部イメージングを実現
SeeDB

今井猛博士らにより、水溶性で生体組織の形態や組成、蛍光蛋白質および蛍光神経トレーサーの蛍光を損なうことなく短時間で簡便に脳などの生体組織を透明化する方法SeeDB(See Deep Brain)が開発されました。SeeDBは、水とフルクトース、還元剤で構成されている製品になります。
SeeDB法は、共焦点顕微鏡や2光子励起顕微鏡を使用して深部イメージングが可能であり、蛍光タンパク質・神経トレーサーを用いての蛍光神経回路の全貌解明や定量解析のなど様々なアプリケーションに利用することができます。
SeeDB法に関する詳しい情報については、今井猛博士らによるウェブサイトSeeDB Resources(https://sites.google.com/site/seedbresources/)を参照下さい。

HPデータ:理化学研究所 多細胞システム形成研究センター(理研CDB)感覚神経回路形成研究チーム 柯孟岑研究員、今井 猛チームリーダーより提供

参考文献:
1) Ke, M. T., Fujimoto, S. and Imai, T. : Nat Neurosci ,16 (8),1154 (2013).
2) Ke, M. T., Fujimoto, S. and Imai, T.: Bio-protocol ,4(3), e1042 (2014).
3) Ke, M. T., and Imai, T. : Curr Protoc Neurosci ,66, 2.22.1-2.22.19 (2014).



SeeDBプロトコル例

SeeDB法について、脊椎動物の様々な組織に対して使用することができますが、マウス脳を例に紹介します。

1.固定
 ① マウス脳を4% パラホルムアデヒド/PBSで 4℃で一晩固定する。
 ② サンプルをPBSで3回洗浄する(各10分間)。


2.透明化処理
 ③ サンプルを20mlのSeeDB:20w/v% Fructose Solutionが入った50mlコニカルチューブに入れる。
   チューブは室温下、ローテーターで4-8時間転倒回転する(約4rpm)。
   脆弱なサンプルやスライスの場合にはシーソーシェーカーを用いても良いです(約17rpm)。
 ④ サンプルをSeeDB:40w/v% Fructose Solutionの入った50mlコニカルチューブに移し、室温で4-8時間転倒回転する。
 ⑤ サンプルをSeeDB:60w/v% Fructose Solutionの入った50mlコニカルチューブに移し、室温で4-8時間転倒回転する。
 ⑥ サンプルをSeeDB:80w/v% Fructose Solutionの入った50mlコニカルチューブに移し、室温で12時間転倒回転する。
 ⑦ サンプルをSeeDB:100w/v% Fructose Solutionの入った50mlコニカルチューブに移し、室温で12時間転倒回転する。
 ⑧ サンプルをSeeDBの入った50mlコニカルチューブに移し、室温で24時間転倒回転する。
   最大48時間まで延ばしても良いです。
   うまく透明化できている場合、光にかざすと組織が透明になっているのが確認することができます。


3.観察
 ⑨ SeeDB処理した脳サンプルを共焦点レーザー顕微鏡若しくは2光子励起顕微鏡を用いて観察する。

〈注意、ポイント〉
サンプルはSeeDB液でマウントしてください。SeeDBを用いて透明化処理したサンプルの屈折率は1.49と高くなります。このため、対物レンズにはグリセリン浸レンズ、油浸レンズ、透明化用レンズが適していますが、水浸レンズでも深さ2mm程度までであれば問題ありません。イマージョンには各メーカー推奨のイマージョン液をご使用ください。SeeDB液をイマージョンに用いないでください。ドライレンズ(屈折率1.0)や水浸レンズ(屈折率1.33)を用いて画像取得する場合は、深さの数値を補正する必要があります(補正式については参考文献参照)。

SeeDB処理例

SeeDB処理例

SeeDB観察例

SeeDB観察例

SeeDB観察例

SeeDB観察例



Thy1-YFP-H マウス脳 イメージング動画

左:イメージングエリア 1.2mm×1.2mm×3.3mm
右:イメージングエリア 4mm×5mm(8×10 tiles) 2mm厚

価格表

コードNo. 品 名 規 格 容 量 希望納入価格(円)
291-79601 SeeDB Trial Kit 組織透明化用 1kit 30,000
193-18391 SeeDB:20w/v% Fructose Solution 組織透明化用 250mL 8,000
196-18401 SeeDB:40w/v% Fructose Solution 組織透明化用 250mL 8,000
193-18411 SeeDB:60w/v% Fructose Solution 組織透明化用 250mL 8,000
190-18421 SeeDB:80w/v% Fructose Solution 組織透明化用 250mL 8,000
197-18431 SeeDB:100w/v% Fructose Solution 組織透明化用 250mL 8,000
194-18441 SeeDB 組織透明化用 250mL 8,000

*製品コードをクリックするとSiyaku.comにリンクしますので、現在の価格、在庫はそちらからご確認下さい。

関連製品

コードNo. 品 名 規 格 容 量 希望納入価格(円)
160-16061 劇物3 Paraformaldehyde 組織固定用 100g 2,250
162-16065 500g 4,500
164-25511 1×PBS(-) 生化学用 5L 12,000
045-33421 refrigerator DiIC18(3) 細胞生物学用 10mg 7,200
041-33423 50mg 23,000

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refrigerator・・・2〜10℃保存   freeze・・・-20℃保存   -80 degree C・・・-80℃保存   表示がない場合は室温保存です。
特定毒物・・・特定毒物   毒物1 毒物2・・・毒物   劇物1 劇物2 劇物3・・・劇物   毒薬・・・毒薬   劇薬・・・劇薬   危険物・・・危険物   向精神薬・・・向精神薬
特定麻薬向精神薬原料・・・特定麻薬向精神薬原料   化審法 第一種特定化学物質・・・化審法 第一種特定化学物質   化審法 第二種特定化学物質・・・化審法 第二種特定化学物質
化学兵器禁止法 第一種指定物質・・・化学兵器禁止法 第一種指定物質   化学兵器禁止法 第二種指定物質・・・化学兵器禁止法 第二種指定物質
カルタヘナ・・・カルタヘナ   覚せい剤取締法・・・覚せい剤取締法   国民保護法・・・国民保護法

*上記以外の法律および最新情報は、siyaku.com(http://www.siyaku.com/)をご参照下さい。

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表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
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