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Phos-tag®プレキャストゲル
スーパーセップ™Phos-tag®

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Phos-tag®アクリルアミドを共重合させたプレキャストゲルです。開封後すぐにご使用頂けます。本品を使用することでりん酸化タンパク質をりん酸化レベルに応じて分離できます。また従来のSuperSep™同様に中性ゲルバッファーを採用しているため保存安定性に優れており、シャープなバンドが得られます。

※ 本品を使用する前に通常の SDS-PAGE で泳動パターンに問題がないことを確認してください(アプライ量が適切か、目的タンパク質が分解されていないか、等)。
比較データの取得には同じアクリルアミド濃度のスーパーセップ™をおすすめいたします(参照:使用例2)。


リンク関係

 

■関連製品


特 長

イメージReady-to-use 貴重な時間を節約!

・りん酸化タンパク質をりん酸化レベルに応じて分離

・分離がよくバンドがシャープ

 

 

 

 

 

 

 

使用例1

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〔泳動用緩衝液〕トリス-グリシン-SDS泳動緩衝液
〔泳動用試料〕
レーン1:未処理アルブミン
レーン2:脱りん酸化アルブミン
〔泳動条件〕20mA、70分
〔染色法〕クイックCBB染色
〔脱色〕脱イオン水







アルブミン(コードNo. 010-17071) をアルカリホスファターゼ(ニッポンジーン社 コードNo. 319-02661)を用いて脱りん酸化処理を行った。その結果、バンドシフトにより脱りん酸化が確認できた。









使用例2

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〔泳動用緩衝液〕
トリス-グリシン-SDS泳動緩衝液
〔泳動用試料〕
レーン1:β-カゼイン(AP処理, 0分)
レーン2:β-カゼイン(AP処理, 15分)
レーン3:β-カゼイン(AP処理, 30分)
レーン4:β-カゼイン(AP処理, 45分)
レーン5:β-カゼイン(AP処理, 60分)
〔泳動条件〕35mA、60分
〔染色法〕クイックCBB染色
〔脱色〕脱イオン水

β-カゼインを経時的に脱りん酸化処理を行った。その結果、りん酸化/脱りん酸化β-カゼインの分離が確認できた。また、経時的な脱りん酸化レベルの確認ができた。









使用例3

りん酸化状態の経時変化

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●方法 ヒト肺ガン由来Lu99細胞にX線(5Gy)を照射し、経時的に細胞を回収した。細胞抽出液を調製し、スーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 10%, 13ウェルを用いてSDS-PAGEを行った。
 ゲルを10mmol/l EDTAを含むトランスファーバッファーで振とう後、PVDF膜へ転写した。メンブレンは、2%Milk/TBS-Tでブロッキングした後、一次抗体と反応させた(上段:p53, 下段:細胞周期関連タンパク質)。検出は化学発光試薬を用いて行った。

●結果 p53は、X線照射により、タンパク質の蓄積が4時間後をピークに見られた。プロテインXは、X線照射により、りん酸化の状態が変化することがわかった。

使用例4

コントロールタンパク質の泳動

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●泳動条件:30mA/ゲル(定電流), 60分
●サンプル:5μg/lane α-カゼイン, ウシ乳由来, 脱りん酸化
(コードNo. 038-23221)
*本品は脱りん酸化されていないα-カゼインが含まれています。通常のSDS-PAGEでは1本のメインバンドが見られますが、Phos-tag SDS-PAGEではα-カゼインとα-カゼイン, 脱りん酸化の2本のメインバンドが見られます。
●サンプルバッファー:Sample Buffer Solution (2ME+) (X4)
(コードNo. 191-13272)
【販売終了】
●ランニングバッファー:SDS-PAGE バッファー, pH8.5
(コードNo. 192-16801)
●染色:クイックCBBプラス(コードNo. 174-00553)

P10%(左) : スーパーセップ™Phos-tag® (50μmol/l), 10%, 13ウェル
P15%(中) : スーパーセップ™Phos-tag® (50μmol/l), 15%, 13ウェル
A15%(右) : スーパーセップ™エース, 15%, 13ウェル


スーパーセップ™ Phos-tag®

コードNo. 品 名 容 量
192-17401 refrigerator スーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 6%, 13ウェル 5枚
199-17391 refrigerator スーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 6%, 17ウェル 5枚
195-17371 refrigerator スーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 7.5%, 13ウェル 5枚
192-17381 refrigerator スーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 7.5%, 17ウェル 5枚
193-16711 refrigeratorスーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 10%, 13ウェル 5枚
190-16721 refrigeratorスーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 10%, 17ウェル 5枚
195-16391 refrigeratorスーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 12.5%, 13ウェル 5枚
193-16571 refrigeratorスーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 12.5%, 17ウェル 5枚
193-16691 refrigeratorスーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 15%, 13ウェル 5枚
196-16701 refrigeratorスーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 15%, 17ウェル 5枚
197-16851 refrigeratorスーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 17.5%, 13ウェル 5枚
194-16861 refrigeratorスーパーセップ™ Phos-tag® (50μmol/l), 17.5%, 17ウェル 5枚

電気泳動槽

コードNo. 品 名 容 量
058-07681 イージーセパレーター™ 1セット

コントロール用タンパク質

コードNo. 品 名 容 量
038-23221 freeze α-カゼイン, ウシ乳由来, 脱りん酸化

*本品は脱りん酸化されていないα-カゼインが含まれています。Phos-tag®SDS-PAGEにより2本のメインバンドを確認できます。

1mg
034-23223 10mg
031-23211 freeze α-カゼイン, ウシ乳由来 1mg
037-23213 10mg

 

 

Q&A

Q1. ゲル染色法は何が使用できますか?
A1. CBB染色、ネガティブ染色、銀染色、蛍光染色など通常使用される染色法で問題ありません。

Q2. CBB染色後の色抜けが悪い。
A2. 脱色時に電子レンジを使用することできれいに色抜けします。
処理法:脱イオン水100mlに染色ゲルを移し、丸めたキムワイプを数枚入れ、電子レンジにセットし数分間加熱処理をして下さい。脱イオン水を換え同様の操作を3〜4回繰り返して下さい。熱くなるので注意して下さい。

Q3. ウエスタンブロットに使用できますか?
A3. 使用できます。ただし、メンブレンへの転写効率が悪いためEDTA処理によりゲル中の亜鉛を取り除く必要があります。
処理法:10mmol/l EDTAを含む転写バッファー(25mmol/l Tris, 192mmol/l Glycine, 10% MeOH)に浸し、10分間ゆっくり振とうして下さい。同様の操作を3回行って下さい。その後、EDTAを含まない転写バッファー(25mmol/l Tris, 192 mmol/l Glycine, 10% MeOH)で10分間振とう後、PVDFメンブレンまたはニトロセルロースメンブレンへ転写して下さい。転写効率が悪い場合はEDTA処理回数を増やす、EDTA濃度を上げるなど転写条件をご検討下さい。

Q4. バンドが歪んでしまう。
A4. EDTA、無機塩類、界面活性剤などを含むサンプルはバンドの歪み、テーリングの原因となります。そのため、サンプルはTCA沈殿や透析で脱塩して下さい。また空レーンがある場合も歪みの原因となるため空レーンに試料用緩衝液(×1)をアプライして下さい

Q5. 目的とするタンパク質のりん酸化、非りん酸化が分離されていない。
A5. ポジティブコントロールとしてβ-カゼイン、ネガティブコントロールとしてアルカリホスファターゼ処理したβ-カゼインを泳動しバンドシフトが起きているか確認して下さい。バンドシフトが確認できた場合、本品のPhos-tag®濃度もしくはアクリルアミド濃度では目的タ ンパク質のりん酸化、非りん酸化が分離できていない場合があります。

Q6. 細胞粗抽出液を使用することはできますか?
A6. 使用できます。ただし、目的とするタンパク質によってはRf値が小さくバンドの分離が不明瞭になる可能性があります。

Q7. 1ウェルあたりにアプライするサンプル量は?
A7. 精製タンパク質の場合:1〜5μg(CBB染色の場合)、組織・細胞抽出液の場合:10〜30μg(発現タンパク量に合わせて調整して下さい。)
 *目安の値ですので、必ず事前に通常のSDS-PAGE、Western Blotを行い適切なサンプル量を検討して下さい。

Q8. 分子量マーカーは何を使用すればいいですか。
A8. 推奨のマーカーはありません。本品ではマーカーの分子量が反映されません。そのため、マーカーの代わりにネガティブコントロールとして大腸菌由来の組換えタンパク質または脱りん酸化処理したサンプルを推奨致します。

Q9. 本品中の錯体イオンは何ですか?
A9. 亜鉛イオンです。

Q10. バンドシフトがりん酸化によるものか判別する方法は?
A10.ゲル濃度が同濃度の12.5% SuperSepTMAce(コードNo. 199-14971)で電気泳動を行い、目的タンパク質が分解されていないか確認して下さい。

 

 




refrigerator・・・2〜10℃保存   freeze・・・-20℃保存   -80 degree C・・・-80℃保存   表示がない場合は室温保存です。
tokuteidoku・・・特定毒物   doku1 doku2・・・毒物   geki1 geki2 geki3・・・劇物   dokuyaku・・・毒薬   gekiyaku・・・劇薬   kiken・・・危険物   kouseishinnyaku・・・向精神薬
kashin1・・・化審法 第一種特定化学物質   kashin2・・・化審法 第二種特定化学物質
kahei1・・・化学兵器禁止法 第一種指定物質   kahei2・・・化学兵器禁止法 第二種指定物質
tokumagenn・・・特定麻薬向精神薬原料   dokuso・・・国民保護法   kakuseizai・・・覚せい剤取締法   cartagena・・・カルタヘナ   dai・・・・ダイオキシン類

*掲載内容は、本記事掲載時点の情報です。上記以外の法律および最新情報は、siyaku.com(http://www.siyaku.com/)をご参照下さい。

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。製品コードをクリックするとSiyaku.comにリンクしますので、現在の価格、在庫はそちらからご確認下さい。

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