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未分化ヒトES/iPS細胞検出試薬 培養液に添加するだけでヒトES/iPS細胞を検出!
蛍光標識rBC2LCN(AiLecS1)

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 rBC2LCN(AiLecS1) はBurkholderia cenocepacia 由来のレクチンであるBC2L-CのN末端ドメインを大腸菌で発現させた組換え体レクチンです。rBC2LCNはヒトES/iPS細胞表面に存在するポドカリキシン上のムチン様O型糖鎖であるH-type3(Fucα1-2Galβ1-3GalNAc)に高い親和性を持つため、ヒトES/iPS細胞の未分化マーカーとして報告されています。
 本品は、蛍光色素でラベル化されており、ヒトES/iPS細胞の培養液に添加することで、未分化細胞を生きたまま解析することができるます。細胞染色、フローサイトメトリーのいずれにもご使用頂けます。また、本品の共存下で数日間培養を続けても細胞毒性は確認されておりません。
 緑色蛍光標識体(FITC)、黄色蛍光標識体(Cy3領域)、赤色蛍光標識体(Cy5領域)の3種類をラインアップしております。


特長

  • 培地に添加するのみで染色可能
  • 細胞固定せず細胞を生きたまま明瞭に染色可能
  • 細胞毒性が低く、染色した状態で培養可能
  • Tra-1-60, Tra-1-81, SSEA-3, SSEA-4と同様に細胞表面上の糖鎖を認識
  • 細胞染色、フローサイトメトリーに使用可能

製品概要

  • 無菌試験済み(0.1μmフィルターでろ過滅菌)
  • PBS(-)溶液
  • 実用希釈倍率
     Live Cell Imaging 1:100〜1,000
     Flow Cytometry 1:100〜1,000
  • 励起波長・発光波長

  • Excitation Emission
    rBC2LCN-FITC 495nm 520nm
    rBC2LCN-547 551nm 565nm
    rBC2LCN-635 634nm 654nm

使用方法

《 細胞染色 》

 ■ 生細胞染色(Live Cell Imaging)

  1. 培養中のヒトES/iPS細胞を準備する。
  2. 培地 1ml あたり、蛍光標識rBC2LCNを 1〜10μl 添加する。
  3. 37℃、5%CO2下で30分間インキュベートする。
  4. 新しい培地あるいはHBSS(+)に交換する。
  5. 蛍光顕微鏡を用いて観察する。
  ■ 固定細胞の染色
  1. 培養中のヒトES/iPS細胞を準備する。
  2. 培地を除去し、HBSS(+)で洗浄する。
  3. 4%パラホルムアルデヒド溶液(PFA)を添加し、室温で10〜20分間静置する。
  4. PFAを除去後、D-PBS(-)で3回洗浄する。
  5. D-PBS(-)を添加する。
  6. D-PBS(-) 1ml あたり、蛍光標識rBC2LCNを 1〜10μl 添加する。
  7. 37℃、5%CO2下で30分間インキュベートする。
  8. D-PBS(-)に交換する。
  9. 蛍光顕微鏡を用いて観察する。

《 フローサイトメトリー 》

  1. 培養中のヒトES/iPS細胞を準備する。
  2. 細胞分散溶液を用いて、シングルセルに分散する。
  3. 細胞分散溶液をチューブに移し、1,000rpmで3分間遠心する。
  4. 上清を除去後、FCM Buffer*で細胞を懸濁し、遠心後、上清を捨てる。
      * FCM Buffer:D-PBS(-)やHBSS(-)もしくはそれらに10mmol/l EDTA、1% BSAを含むもの
  5. 5×106cells/mlとなるようにFCM Bufferで懸濁する。
  6. 細胞懸濁液 1ml あたり、蛍光標識rBC2LCNを 1〜10μl 添加する。
  7. 遮光して室温で30分間静置する。
  8. 1,000rpmで3分間遠心し、上清を捨てる。
  9. FCM Bufferで細胞を懸濁し、遠心後、上清を捨てる。
  10. 適量のFCM Bufferで再懸濁する。
  11. フローサイトメトリーに供する。
  〔使用上の注意〕
  1. rBC2LCNによる染色は、2、3日間は維持されます。
  2. 血清を含む培地を使用しているときは、シグナルのバックグラウンドが高くなる可能性があります。
  3. フローサイトメトリーにより細胞のソーティングを行う場合は、細胞分散時やFCM Bufferに終濃度10μmol/lとなるようにY-27632を添加してください。

ヒトiPS細胞の生細胞染色(Live Cell Imaging)

■ rBC2LCN-FITC及びrBC2LCN-635, Hoechst33342を用いてヒトiPS細胞201B7株を染色した(細胞固定無し)。

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                                           (希釈倍率 1:1,000)

■ rBC2LCN-FITC, Tra-1-60, Tra-1-81, SSEA-4を用いて、ヒトiPS細胞201B7株を染色し、2時間後に染色像を確認した(細胞固定無し)。

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                                                  (希釈倍率 1:100)

 

★rBC2LCNはTra-1-60, Tra-1-81と比較して、生細胞染色強度が強い。

★rBC2LCNは培地交換後も2日目まで鮮明に染色が持続する。


ヒトES細胞の生細胞染色(Live Cell Imaging)

rBC2LCN-FITCを用いてヒトES細胞WA01株を染色した(細胞固定無し)。細胞の一部分が未分化状態を維持できず、分化している。rBC2LCN-FITCを用いて生細胞染色すると、未分化状態を維持している部分は染色されるが、分化している部分は染色されていないことが分かる。

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<データご提供 国立研究開発法人 産業技術総合研究所 創薬基盤研究部門 幹細胞工学研究グループ 小沼泰子先生、伊藤弓弦先生 >

ヒトiPS細胞の固定後染色

ヒトiPS細胞201B7株をパラホルムアルデヒドで固定後、rBC2LCNとDAPIを用いて細胞染色した。

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ヒトiPS細胞に対する細胞毒性評価

ヒトiPS細胞201B7株の培養液に培養液の1/1,000、1/100、1/50量のrBC2LCN-FITCを添加した状態で培養を続けた。その結果、いずれの濃度でもrBC2LCN-FITCの濃度に関わらず、同程度の細胞増殖を示すことを確認した。

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〔細胞株〕
  ヒトiPS細胞201B7株

 〔培地組成〕
  StemSure®hPSC培地Δ + 35ng/ml bFGF

 〔コーティング〕
  Matrigel® hESC-Qualified Matrix

 〔細胞播種数〕
  4×104cells/well(12ウェルプレートを使用)

Flow Cytometryを用いたヒトiPS細胞の分離

rBC2LCN-FITC及びrBC2LCN-547、rBC2LCN-635を用いてヒトiPS細胞201B7株とヒト正常二倍体線維芽細胞を染色し、フローサイトメトリーに供した。結果、未分化であるヒトiPS細胞と分化したヒト二倍体線維芽細胞を分離できた。

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参考文献

  • Onuma, Y., et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun., 431, 524, (2013).
  • Tateno, H., et al.: Stem Cells Transl. Med., 2, 265, (2013).
  • Tateno, H., et al.: Sci. Rep., 4, 4069, (2014).

価格表

コードNo. 品 名 規 格 容 量 希望納入価格(円) 保存温度・法規情報
180-02991
186-02993
 rBC2LCN-FITC 【AiLecS1-FITC】
  Ex. 495nm, Em. 520nm
細胞染色用 100μl
100μl×5
20,000
80,000
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186-03211
182-03213
 rBC2LCN-547 【AiLecS1-547】
  Ex. 551nm, Em. 565nm
細胞染色用 100μl
100μl×5
30,000
120,000
イメージ
185-03161
181-03163
 rBC2LCN-635 【AiLecS1-635】
  Ex. 634nm, Em. 654nm
細胞染色用 100μl
100μl×5
30,000
120,000
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*希望納入価格には消費税等が含まれておりません。

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コードNo. 品 名 規 格 容 量 希望納入価格(円) 保存温度・法規情報
299-78301
再生医療研究用 96回用 96,000 イメージ

★rBC2LCNストリッピング溶液★
 
 未分化細胞の細胞表面に存在する糖鎖と結合したrBC2LCNレクチンを細胞から剥離させることができます。rBC2LCN剥離後、細胞を他の抗体で染色することや、培養を継続することが可能です。

コードNo. 品 名 規 格 容 量 希望納入価格(円) 保存温度・法規情報
182-03171
細胞培養用 10ml 15,000 イメージ

★BC2LCNレクチン, 組換え体、溶液★
 
 未標識のrBC2LCNもラインアップしています。

コードNo. 品 名 規 格 容 量 希望納入価格(円) 保存温度・法規情報
029-18061
025-18063
 BC2LCN 【AiLecS1】 Lectin, recombinant, Solution
糖鎖研究用 1mg
1mg×5
30,000
照会
イメージ

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 フィーダーフリー条件下でヒト多能性幹細胞(ヒトES細胞及びヒトiPS細胞)の維持培養に使用できる無血清の液体培地です。原料に動物由来物を含む成分を使用しておりません。

コードNo. 品 名 規 格 容 量 希望納入価格(円) 保存温度・法規情報
197-17571
193-17573
StemSure®hPSC Medium Δ
細胞培養用 100ml
100ml×4
6,000
20,000
イメージ
062-06661
068-06663
bFGF Solution, MF
細胞培養用 50μl
50μl×4
80,000
260,000
イメージ
160-27051
hPSC Dissociation Solution
 ヒトiPS細胞用細胞分散剤
細胞培養用 100ml 3,000 イメージ

★StemSure®シリーズ★

 マウスES細胞D3株を用いて品質試験を行っています。

コードNo. 品 名 規 格 容 量 希望納入価格(円) 保存温度・法規情報
197-16275
StemSure® D-MEM with Phenol Red and Sodium Pyruvate
細胞培養用 500ml 4,600 イメージ
197-16775
StemSure® Serum Replacement
細胞培養用 500ml 40,000 イメージ
198-15781
StemSure® 10mmol/l 2-Mercaptoethanol Solution(×100)
細胞培養用 100ml 7,000 イメージ
195-15791
StemSure® 50mmol/l Monothioglycerol Solution(×100)
 2MEと同等に使用できる還元剤。
細胞培養用 100ml 8,000 イメージ
190-15805
StemSure® 0.1w/v% Gelatin Solution
細胞培養用 500ml 7,000  
195-16031
StemSure® Freezing Medium
 BSAを含むES/iPS細胞用凍結保存溶液
細胞培養用 100ml 12,000 イメージ
197-17831
StemSure® hPSC Freezing Medium, AF
 アニマルフリーのES/iPS細胞用凍結保存溶液
細胞培養用 100ml 16,000 イメージ
199-16051
195-16053
StemSure® LIF, Mouse, recombinant, Solution
細胞培養用 106units
106units×10
30,000
150,000
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*希望納入価格には消費税等が含まれておりません。


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※掲載内容は2017年2月時点での情報です。上記以外の法律および最新情報は、siyaku.com をご参照ください。

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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