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老化細胞を定量的に検出
同仁化学 細胞老化(SA-β-Gal)検出キット

本キットに含まれるβ-ガラクトシダーゼ検出試薬SPiDER-βGalは、細胞膜透過性が高く、優れた細胞内滞留性を有し反応後の基質が細胞外へ漏れ出さない、という性質があり、細胞内β-ガラクトシダーゼの高感度検出、短時間染色を実現できます。
また、蛍光検出が可能なことから、X-gal染色法では適用できなかったフローサイトメトリーも利用することができ、定量性のあるデータを取得することができます。


リンク関係


特長

  • 生細胞も固定化細胞も適用可能
  • 定量が容易

原理

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キットの使用手順

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特長@.生細胞も固定化細胞も適用可能

特長A.定量が容易

○従来法(X-gal法)では
目視による判断のため、客観的な測定が難しい。

○本キットでは
蛍光による検出なのでフローサイトメトリーによる定量解析ができる。


フローサイトメーターによる定量解析

スペクトル型セルアナライザー SA3800(ソニーイメージングプロダクツ&ソリューションズ株式会社)を用いた老化細胞の定量解析を行いました。

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スペクトル型セルアナライザー SA3800
(ソニーイメージングプロダクツ&ソリューションズ株式会社)
詳細はこちら

横軸にSPiDER-βGal染色による蛍光強度、縦軸に細胞数をとり任意のしきい値を設定し、SA-β-gal発現細胞の陽性率を算出しました。

■実験条件

老化細胞のモデルとして継代培養を20回繰り返したWI-38細胞と継代回数2回のWI-38細胞を用いて、本キットによるSA-β-galの検出を行いました。


■検出条件

・Excitation(Laser) : 488nm
・Emission(スペクトル検出) : 420-800 nm

■結果

継代培養を繰り返したWI-38細胞において、約90%の細胞がSA-β-galの発現が亢進していることを確認しました。


スペクトル検出

老化細胞ではリポフスチン等の生成によりバックグラウンドとしてみられることがあります。
しかし、本装置では蛍光スペクトル検出が可能なため、老化細胞のバックグラウンドを予めスペクトルで確認し、SPiDER-βGalの蛍光パターンを選択的に読み込むことで、より鮮明にSA-β-gal発現細胞の検出ができます。

共焦点定量イメージサイトメーターによる定量解析

共焦点定量イメージサイトメーターCQ1(横河電機株式会社)を用いた老化細胞の定量解析を行いました。

共焦点定量イメージサイトメーターCQ1
(横河電機株式会社)
詳細はこちら

核染色試薬(Hoechst 33342)で全細胞数を計測し、SPiDER-βGalでSA-β-galを指標とした老化細胞数を計測した後、全細胞数に対する老化細胞数の割合を陽性率として定量解析を行いました。

WI-38細胞の細胞分裂の程度に応じて陽性率に差が認められました。共焦点定量イメージングサイトメーターを用いることで、X-gal法による目視観察と比較して迅速な定量解析が可能となりました。

価格表

コードNo. メーカーコード 品 名 容 量 希望納入価格(円)
347-09181 SG03 細胞老化(SA-β-Gal)検出キット 10回用 38,000

*本キットは体外診断用ではありません。
*希望納入価格には消費税等が含まれておりません。

 

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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