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組織中の8-OHdG測定に
DNAエキストラクター®TISキット
8-OHdG測定前処理試薬セット

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活性酸素によりDNA中のグアニン塩基が酸化され8-OHdG(8-ヒドロキシ-2'-デオキシグアノシン)が生成されるため、8-OHdGは酸化ストレスマーカーとして測定されています。組織からDNAを抽出する際には、操作中のDNA酸化を抑えることが重要になります。

ヒト、動物の柔組織DNA抽出用
DNA エキストラクター®TISキット

本キットは、主にヒトや動物の柔組織を対象としたDNA抽出キットです。従来のエキストラクターシリーズ同様、よう化ナトリウム法を基本原理としているため、劇物であるフェノール/クロロホルムを使用することなく一連の抽出作業を行うことができます。また、よう化ナトリウム法は操作中の酸化が比較的少ない DNA抽出法として知られていますが、本キットは、酸化抑制剤を用いることにより、さらに酸化が抑制されたDNAを抽出できるため、酸化ストレスマーカーである8-OHdG(8-ヒドロキシ-2'-デオキシグアノシン)の測定に有用です。

特長

  • 酸化ストレスマーカーである8-OHdGの検出・測定に有用
  • 酸化抑制剤を使ってさらにDNAの酸化を抑制
  • ヒト、動物の柔組織からのDNA抽出に最適

使用法

プロトコール

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処理可能なサンプル量および推定DNA取得量

組織種 組織100mg当りの
DNA収量
処理可能な
最大組織重量
予想される
DNA取得量
脾臓 1〜1.5mg 30mg 300〜450μg
腎臓 400〜500μg 100mg 400〜500μg
400〜500μg 100mg 400〜500μg
膵臓 400〜500μg 100mg 400〜500μg
小腸 300〜400μg 100mg 300〜400μg
肝臓 250〜300μg 150mg 約400μg
250〜300μg 150mg 約400μg
精巣 約200μg 150mg 約300μg
100〜150μg 180mg 200〜300μg
心臓 約100μg 200mg 約200μg
*マウス組織を用いた実績に基づいています。

キット内容

  • 溶解液   75ml×2本
  • 酵素反応液   15ml×1本
  • RNA分解酵素液   50μl×1本
  • タンパク分解酵素液   750μl×1本
  • 酸化抑制剤   350μl×1本
  • よう化ナトリウム溶液   15ml×1本
  • アルコール液   30ml×1本
  • PEG溶液   20ml×1本

使用例

マウス肝臓からのDNA抽出および8-OHdG量の測定

マウス肝臓(同一固体)からDNA Extractor(R) TIS KitおよびDNA Extractor(R) WB Kit(コードNo. 291-50502)を使ってDNAを抽出した。
取得したDNAを8-OHdG測定前処理試薬セットを用いてヌクレアーゼP1処理しモノヌクレオチド化した後、高感度8-OHdGチェック(日研ザイル(株)製 コードNo. 307-07921)(ELISA法)およびHPLC/ECDによって8-OHdG量を測定し、両者を比較した。

高感度8-OHdGチェック(ELISA法)による測定

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HPLC/ECDによる測定

  8-OHdG濃度
(nmol/l)
dG濃度
(μmol/l)
8-OHdG/106dG
DNA Extractor(R) TIS Kit 0.59 692 0.8
DNA Extractor(R) WB Kit 1.41 687 2.1


<HPLC条件>
カラム:Wakopak(R) Wakosil-U 5C18 RS φ4.6mm×150mm
溶離液:50mmol/l 酢酸ナトリウム(pH 5.2),9% メタノール
流速:1ml/min.
吸光度:UV260nm
ECD電解電位:+600mV

DNA抽出操作時の酸化により8-OHdGが発生することが知られているが、DNA Extractor(R) TIS Kitを用いることにより、操作中の酸化が比較的少ないDNA Extractor(R) WB Kitと比較しても、操作中の8-OHdG発生量を半分以下に抑制することができた。
また、dG中の8-OHdG濃度も非常に低いことが明らかになり、8-OHdG測定用のDNA抽出キットとして優れた性能が示された。

価格表

コードNo. 品 名 容 量 希望納入価格(円)
296-67701 DNA Extractor(R) TIS Kit 50回用 33,000

本キットは体外診断用ではありません。

*表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
*表示している希望納入価格は2012年12月の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

DNAの加水分解処理に
8-OHdG測定前処理試薬セット

組織中の8-OHdGを測定する場合、組織より抽出したDNAの加水分解処理が必要です。本品は、8-OHdG測定の前処理に使用する酵素、バッファー類をセット化した試薬です。測定対象となるDNAサンプルに対して、各々の試薬を添加し反応を進めることによって、ヌクレアーゼ処理状態のバラつきを軽減し、安定した8-OHdGの測定が可能です。


特長

  • 8-OHdG測定の前処理に必要な酵素類やバッファー類をすべてセット化
  • 反応のバラつきを軽減し、安定した8-OHdGの測定が可能

使用法

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セット内容

  • 酢酸バッファー   950μl×1本
  • ヌクレアーゼP1   500units×1本
  • トリスバッファー   1ml×1本
  • アルカリホスファターゼ溶液   50μl×1本

使用例

マウス肝臓からのDNA抽出および8-OHdG量の測定

価格表

コードNo. 品 名 容 量 希望納入価格(円)
292-67801 8-OHdG Assay Preparation Reagent Set 50回用 35,000

本キットは体外診断用ではありません。

*表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
*表示している希望納入価格は2012年12月の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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145-08221 Nuclease P1 500units 19,000

日研ザイル(株)製
8-OHdG測定用ELISAキット
高感度8-OHdGチェック

8-OHdGを競合ELISA法により測定するキットです。

測定範囲:0.125〜10ng/ml

コードNo. メーカーコード 品 名 容 量 希望納入価格(円)
307-07921 KOG-HS10E High Sensitive 8-OHdG Check 96回用 80,000

HPLC用カラム
ワコーパック®ワコーシル-U 5C18 RS

カラムサイズ:φ4.6mm×150mm

コードNo. 品 名 タイプ 容 量 希望納入価格(円)
238-51471 Wakopak®Wakosil-U 5C18 RS デュポン(D) 1本 45,000
234-51473 Wakopak®Wakosil-U 5C18 RS ウォーターズ(W) 1本 45,000

 

*表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
*表示している希望納入価格は2012年12月の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

 

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。最新価格は「製品検索」からコードNo.で検索してご確認ください。

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